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标题: 脐带间充质干细胞原代培养问题 [打印本页]

作者: blackhei 时间: 2017-11-29 15:35 标题: 脐带间充质干细胞原代培养问题

组织块贴壁法培养脐带间充质干细胞，换液的时候会把一些小的组织块吸掉，这会不会有影响呢？另外贴壁法培养干细胞的原理是什么？

作者: zxb1105453899 时间: 2017-11-30 08:36

我们之前都是在有细胞爬出来的时候（一般在第5天或6天）在进行换液，那时候如果组织已经脱落了吸掉也没关系，另外最好用专用的塑料吸管吸，这样不容易把其他组织弄脱落

作者: blackhei 时间: 2017-11-30 09:31

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这样的话是不是爬出的细胞就少了呢？如果就是吸掉也没有关系的话，说明贴壁的原理是什么呢？希望得到您的解答

作者: 2357710447 时间: 2017-11-30 09:47

间充质细胞就是贴壁生长的这就是原理你用悬浮法是不能长出细胞的+ p0 s" q. Q: v U. Q% I
移液管吸掉一些不贴壁的较小的组织块也没关系他不贴壁也不会跑出细胞不用纠结注意原代培养的时候组织块不要剪得太碎就可以了

作者: blackhei 时间: 2017-11-30 14:22

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3 L3 R: Q6 A! \2 l
那贴壁的话是不是靠的是一些细胞因子呢？

作者: 黎黎何 时间: 2017-11-30 14:50

有些细胞会长在组织周围，但不会产生太大的影响

作者: 2357710447 时间: 2017-12-1 09:39

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细胞会分泌细胞外基质，这种细胞外基质黏附在支持物的表面（如培养瓶、培养皿的底面）。
细胞通过其表面的黏附因子与这些细胞外基质结合。所以细胞贴壁与否与细胞本身分泌细胞外基质的能力以及细胞本身表达的黏附分子的数量有关，也与培养皿瓶的表面结构有关。! ~4 F: n' {- o# U, Z' h
培养基中的黏附蛋白也会掺入到细胞外基质中。

作者: blackhei 时间: 2017-12-4 08:54

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谢谢，非常感谢

作者: 随时准备下线 时间: 2017-12-6 16:07

贴壁法培养干细胞，我是这样做的。脐带选择华通胶，剪到合适大小后，贴壁6小时，刚开始细胞不会爬出来，所以可以放少量的培养基，只要能浸润到组织块就可以了。还有换液不要太勤快，我觉得完全没必要。

作者: 1梅梅加油 时间: 2017-12-8 14:25

不会有影响，换液换掉的组织块比较小，如果有细胞爬出也是在它周围，不会把细胞换掉，细胞会继续增殖。

作者: 龙七 时间: 2017-12-11 13:44

培养细胞在未贴附于底物之前一般均似球体样；当与底物贴附后，细胞将逐渐伸展而形成一定的形态，呈成纤维细胞样或上皮细胞样等。细胞附着于底物时并非一种需要能量的过程，一般认为与电荷有关。据资料记载，37℃时在2 min内细胞之间即可形成键，该键可对0.01%胰蛋白酶起作用且仅发现于细胞之间，而细胞与底物之间则无；8 min后才有稳定的键形成。
一些特殊的促细胞附着的物质（如层粘连蛋白、纤维链接蛋白、III型胶原、血清扩展因子等）可能参加细胞的贴附过程。这些促细胞附着因子（或贴壁因子）均为蛋白质，存在于细胞膜表面或培养液尤其血清之中。在培养过程中，这些带阳电荷的促贴附因子先吸附于底物上，悬浮的圆形细胞再与已吸附有促贴附物质的底物附着，以后细胞将伸展成其原来的形态。一般来说，从底物脱离下来的贴附生长型细胞，不能长期在悬浮中生长而将逐渐退变，除非这是一些转化了的细胞或恶性肿瘤细胞。7 {: N u5 j% a* D; a2 \2 V8 R
组织贴壁应该是多个细胞贴壁的宏观表现吧

作者: blackhei 时间: 2017-12-12 09:18

回复龙七的帖子
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谢谢，非常感谢，学习了

作者: yj729506 时间: 2017-12-12 13:08

换液的时候，如果组织块是粘附在平皿上的，但同时该组织块周围并未爬出，就有影响；若是组织块周围已经有成纤维状细胞爬出了，那细胞会继续增殖，则影响不大。
还有，换液的时候最好小心一点，半量换液最佳，因为原代培养过程中，细胞在生长的过程也会分泌一些因子，有利于细胞的长出与增殖，所以保留一半原来的培养液还是好的。# @4 z2 v; A W0 A4 {
以上是我的经验。

作者: 霸气的网名 时间: 2018-1-30 14:29

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+ H8 F. X( f4 [7 a$ u! H
学习了

作者: 单倍体螺旋 时间: 2018-7-15 20:55

这个帖子很好，最近正好在学习相关知识！

作者: 好雨知春 时间: 2022-9-26 19:19

龙七发表于 2017-12-11 13:44 ( f, s' h" [4 {
培养细胞在未贴附于底物之前一般均似球体样；当与底物贴附后，细胞将逐渐伸展而形成一定的形态，呈成纤维细 ...

作者: xph2557 时间: 2023-5-30 10:00

换液换掉的组织块，会不会连细胞一起换掉,观察的有细胞爬出在它周围，换液之后细胞就观察不到，继续培养液没有增值，但是部分会有死细胞是什么原因呢

作者: uu小火车 时间: 2023-7-24 15:58

干细胞贴壁生长，小的组织块脱落影响不大

作者: 18627000462 时间: 2025-2-15 09:51

前来学习

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