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标题: 兔间充质干细胞长的特别慢,急!!! [打印本页]

作者: QQ378349500    时间: 2009-11-28 21:13     标题: 兔间充质干细胞长的特别慢,急!!!

兔间充质干细胞长的特别慢  原代的时候 差不多2周,传第一代之后,按理说7 8 天就应该到第二代,现在都十四天了,还没有长满,细胞量不是很多。求助原因。8 b% L8 r  M8 U4 h3 c9 g% k/ O& [& @
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10%FBS 低糖培养基。  6 e8 D% b* M  o; d

4 ^8 q$ U! e% E同时我也用这个培养基培养软骨细胞,其生长状态比较好。时间差不多 7 天就长满可以传一代。
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大家帮帮忙找找原因。BMSC 到底咋回事呢。
作者: 细胞海洋    时间: 2009-11-28 21:56

建议上传图片,更直观
作者: QQ378349500    时间: 2009-11-29 12:00

这是照的图片,感觉不太像 MSC  ,有点像 纤维细胞。大家帮忙看看。  确实长得很慢。   我的培养瓶没有用鼠尾胶处理。不知道提取方法上是不是有问题。
作者: xxzhang83    时间: 2009-11-29 12:27

我们养大鼠的,有时候也会出现这种情况。; U2 e4 u+ e3 x& O( e. c
兔的细胞可能更脆弱一点吧。
5 T, V) b  B7 W$ T" r8 L; e3 C' J$ o是否怀疑支原体感染~~~; ~3 z: ], T6 e* d) n7 r) Y
另外我们用透气型的培养瓶确实生长效果比不透气的要好~~
作者: QQ378349500    时间: 2009-11-29 12:35

应该不是支原体污染,我用这个培养基同时养的软骨细胞,没问题。  7天就可以传一代。
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我们养BMSC用的玻璃瓶。 没有用鼠尾胶处理瓶底, 不知道影响不影响贴壁。
作者: zhuanzhuan    时间: 2009-11-29 12:58

你的细胞接种密度是不是很稀呢 太稀的话 间质细胞形态就有所变化哦  你可以试一下密度稍微大点  你用的是什么血清呢    用点好的血清会长得快得多哦  血清如果反复冻融了再用的话其营养成分会丢失的哦
作者: QQ378349500    时间: 2009-11-29 13:04

血清没有反复冻融 ,刚打开的新进口的.  可能接种密度稍微稀了点. 不知道你们接种密度如何. 我之前用80ML体积的 培养瓶, 不大不小那种吧. 一般1:3传 . 或者 1:1传到一个250ML的大瓶中,底面积差不多75cm2,
作者: ziyunfei1982    时间: 2009-11-29 15:59

是低糖DMEM?离心了么?
0 r3 c3 G- O" u3 b可以直接抽骨髓,不用离心,贴壁24小时后换液。不要洗的太过。长得慢的原因可能有:接种密度低,原代取材试验时间长,梯度离心细胞分的太纯。。兔子BMSC长的不如大鼠快,个人经验:玻璃瓶比塑料一次性的瓶子要贴壁好一点
作者: ziyunfei1982    时间: 2009-11-29 16:04

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作者: QQ378349500    时间: 2009-11-29 16:30

是低糖DMEM?离心了么?
4 h8 O2 E6 N: M: P% @$ z可以直接抽骨髓,不用离心,贴壁24小时后换液。不要洗的太过。长得慢的原因可能有 ...
& `. h  @2 X" oziyunfei1982 发表于 2009-11-29 15:59
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抽取的时候离心了,主要是去除脂肪, 1500rpm  10min  也就洗了一次。     - d, z* ?) l/ R' c1 l$ q
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那次是24小时全量换液的。  用的是低糖DMEM 。 兄弟看看那个图片像不像纤维细胞?
作者: wyannb    时间: 2009-11-29 17:40

从图像上看不像干细胞啊,更成纤维细胞很像,还有培养干细胞一般都用高糖的DMEM啊,血清一般使用15%的FBS(GIBCO)。培养板一般也要用明胶包被的哦。你的血清含量,和低糖的DMEM是不是影响你的细胞生长速度慢的主要原因呢?
作者: QQ378349500    时间: 2009-11-29 17:59

应该不是的, 低糖和10%的FBS主要是怕诱导他分化, 在扩增期间都是这个 配方。 在诱导的时候,则根据不同的诱导方向改变条件。 兄弟说的明胶包被 ,能具体说说吗,我的QQ就是这个,可以加我QQ具体谈谈。 谢谢了。
作者: wyannb    时间: 2009-11-29 18:47

好的,一会加你qq
作者: ziyunfei1982    时间: 2009-11-30 12:14

高糖容易诱导分化,不建议离心,参照Nature的一篇培养老鼠骨髓间充质的protocol,那里面很详细。坛子里面有那片文献
作者: ziyunfei1982    时间: 2009-11-30 12:21

这个也是成纤维细胞么?
作者: ziyunfei1982    时间: 2009-11-30 12:22

诱导后的
作者: ziyunfei1982    时间: 2009-11-30 12:23

不好意思,没传上
作者: angel-sakura    时间: 2009-11-30 22:59

回复 17# ziyunfei1982
2 d# N! m1 e2 @+ k" l8 Z这种形态的细胞我养的时候也出现过,但没这么集中,都是单个分散很开的,不知道这是不是分化了?有点像神经细胞
作者: ziyunfei1982    时间: 2009-11-30 23:17

17楼图片是诱导后的BMSC,神经细胞方向的




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