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标题: 兔间充质干细胞长的特别慢，急！！！ [打印本页]

作者: QQ378349500 时间: 2009-11-28 21:13 标题: 兔间充质干细胞长的特别慢，急！！！

兔间充质干细胞长的特别慢原代的时候差不多2周，传第一代之后，按理说7 8 天就应该到第二代，现在都十四天了，还没有长满，细胞量不是很多。求助原因。

10%FBS 低糖培养基。 9 p8 V6 U( C; f+ W0 c( l/ X3 `

同时我也用这个培养基培养软骨细胞，其生长状态比较好。时间差不多 7 天就长满可以传一代。
8 ^$ u$ V/ C4 k. ]
大家帮帮忙找找原因。BMSC 到底咋回事呢。

作者: 细胞海洋 时间: 2009-11-28 21:56

建议上传图片，更直观

作者: QQ378349500 时间: 2009-11-29 12:00

这是照的图片，感觉不太像 MSC ，有点像纤维细胞。大家帮忙看看。确实长得很慢。我的培养瓶没有用鼠尾胶处理。不知道提取方法上是不是有问题。

作者: xxzhang83 时间: 2009-11-29 12:27

我们养大鼠的，有时候也会出现这种情况。) g2 W* O" Q9 ~
兔的细胞可能更脆弱一点吧。 M& B: Q' v4 f2 n; [* [( L4 C2 l
是否怀疑支原体感染~~~
另外我们用透气型的培养瓶确实生长效果比不透气的要好~~

作者: QQ378349500 时间: 2009-11-29 12:35

应该不是支原体污染，我用这个培养基同时养的软骨细胞，没问题。 7天就可以传一代。

我们养BMSC用的玻璃瓶。没有用鼠尾胶处理瓶底，不知道影响不影响贴壁。

作者: zhuanzhuan 时间: 2009-11-29 12:58

你的细胞接种密度是不是很稀呢太稀的话间质细胞形态就有所变化哦你可以试一下密度稍微大点你用的是什么血清呢用点好的血清会长得快得多哦血清如果反复冻融了再用的话其营养成分会丢失的哦

作者: QQ378349500 时间: 2009-11-29 13:04

血清没有反复冻融 ,刚打开的新进口的. 可能接种密度稍微稀了点. 不知道你们接种密度如何. 我之前用80ML体积的培养瓶, 不大不小那种吧. 一般1:3传 . 或者 1:1传到一个250ML的大瓶中,底面积差不多75cm2，

作者: ziyunfei1982 时间: 2009-11-29 15:59

是低糖DMEM？离心了么？- n7 T. g- [0 R/ Y
可以直接抽骨髓，不用离心，贴壁24小时后换液。不要洗的太过。长得慢的原因可能有：接种密度低，原代取材试验时间长，梯度离心细胞分的太纯。。兔子BMSC长的不如大鼠快，个人经验：玻璃瓶比塑料一次性的瓶子要贴壁好一点

作者: ziyunfei1982 时间: 2009-11-29 16:04

[img][img][/img][/img]

作者: QQ378349500 时间: 2009-11-29 16:30

是低糖DMEM？离心了么？
/ G& \" U* t7 G2 V! A可以直接抽骨髓，不用离心，贴壁24小时后换液。不要洗的太过。长得慢的原因可能有 ...8 n! T6 N8 `; T, u! i# w( z: i
ziyunfei1982 发表于 2009-11-29 15:59

7 k: T/ h! r1 |7 R7 v( ~
0 L/ @  j9 [' ~
抽取的时候离心了，主要是去除脂肪， 1500rpm  10min  也就洗了一次。

那次是24小时全量换液的。  用的是低糖DMEM 。兄弟看看那个图片像不像纤维细胞？

作者: wyannb 时间: 2009-11-29 17:40

从图像上看不像干细胞啊，更成纤维细胞很像，还有培养干细胞一般都用高糖的DMEM啊，血清一般使用15%的FBS（GIBCO）。培养板一般也要用明胶包被的哦。你的血清含量，和低糖的DMEM是不是影响你的细胞生长速度慢的主要原因呢？

作者: QQ378349500 时间: 2009-11-29 17:59

应该不是的，低糖和10%的FBS主要是怕诱导他分化，在扩增期间都是这个配方。在诱导的时候，则根据不同的诱导方向改变条件。兄弟说的明胶包被，能具体说说吗，我的QQ就是这个，可以加我QQ具体谈谈。谢谢了。

作者: wyannb 时间: 2009-11-29 18:47

好的，一会加你qq

作者: ziyunfei1982 时间: 2009-11-30 12:14

高糖容易诱导分化，不建议离心，参照Nature的一篇培养老鼠骨髓间充质的protocol，那里面很详细。坛子里面有那片文献

作者: ziyunfei1982 时间: 2009-11-30 12:21

这个也是成纤维细胞么？

作者: ziyunfei1982 时间: 2009-11-30 12:22

诱导后的

作者: ziyunfei1982 时间: 2009-11-30 12:23

不好意思，没传上

作者: angel-sakura 时间: 2009-11-30 22:59

回复 17# ziyunfei1982 : ]8 V0 \; H8 a4 a8 G9 L1 C
这种形态的细胞我养的时候也出现过，但没这么集中，都是单个分散很开的，不知道这是不是分化了？有点像神经细胞

作者: ziyunfei1982 时间: 2009-11-30 23:17

17楼图片是诱导后的BMSC，神经细胞方向的

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