干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 请教，干细胞的单克隆化培养方法 [打印本页]

作者: aoppolle 时间: 2009-12-10 10:48 标题: 请教，干细胞的单克隆化培养方法

我看文献说用有限稀释方法可以获得单个细胞。我不知道具体方法，还有就是这种方法可操作性怎么样，成功机会大吗，我导师怕我做不出来

作者: huangxin 时间: 2009-12-10 10:58

用流式细胞仪可以分选单个细胞啊

作者: 火云豹 时间: 2009-12-10 11:17

有限稀释法克隆培养:对数生长期的细胞贴壁生长铺满培养瓶后，pBS洗涤l次，0.5%Tripsin/0.04%EnTA胰酶消化，1000转、5分钟离心，弃上清，加培养液吹打成单细胞悬液，计数细胞约3.lxl06一4.6x106个/毫升，100微升单细胞悬液加900微升体积培养液倍比稀释至 3.1x100一 6x100个/毫升，100微升单细胞悬液加100微升体积培养液接种于96
孔培养板，于37℃、饱和湿度下5%COZ的培养箱中培养，24小时后吸去未贴壁细胞，标记单个细胞生长的培养孔，2一3周后细胞形成克隆，观察不同克隆形态和生长速度。转移到普通培养瓶扩大培养2一3周

作者: amosummer 时间: 2011-8-25 10:53

单个细胞其实挺难，不过可以尝试几个细胞放在96孔板内。一般会有一个能长成克隆，其他的都会死的。

作者: osterix 时间: 2011-8-29 08:59

其实还有更简单的方法，有些细胞在一个孔里不容易长成克隆，因为细胞分泌的一些因子可以影响自身的增殖。我的一般做法是将细胞稀释到100-1000个每毫升时，接种到T25或T75，连续培养后。会出现很多克隆，你用克隆环或者局部消化法，收集消化的克隆细胞，就能获得单克隆细胞株。

作者: fguw 时间: 2011-8-30 02:27

想知道是什么细胞，细胞类型不一样，可能操作也不一样，HES， IPSC？

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)