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标题: microRNA诱导iPS的设想 [打印本页]

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作者: freewangjianwei    时间: 2010-1-17 06:40     标题: microRNA诱导iPS的设想

现在iPS领域一个很关键的问题就是如何用virus free or integration free的方法成功诱导iPS。我有个想法，请大家讨论。
* n% G; W2 @2 s0 cmicroRNA在干细胞更新和分化过程中起到很重要的作用（please read review by Haifan Lin on 2008）。而且，microRNA可以人工合成。
; |- ]% C2 H9 o7 R我们可以用microRNA chip的方法找出在ESC和MEF表达显著差异的microRNA，然后用yamanaka的方法去筛选最佳组合。
8 d; [3 t4 H5 c/ @请拍砖

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作者: 双刀    时间: 2010-1-17 15:52

如何导入？

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作者: freewangjianwei    时间: 2010-1-17 18:24

合成的microRNA可以直接放入细胞培养液中，和RNAi一样

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作者: juan880929    时间: 2010-1-17 20:31

很好的想法

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作者: 饶冠华    时间: 2010-1-18 09:04

哈哈 和我的想法一样~~　我是一直在想就单纯用ｍｉＲＮＡ能不能ＩＰＳ普通细胞。但是现在ｍｉＲＮＡ的数目还不是很多，并且功能也不是很清楚，所以有一定困难。而且ｍｉＲＮＡ主要是降解ｍＲＮＡ，而对转录水平的基因调控相对较弱，个人看法就是目前ｍｉＲＮＡ网络式的调控还没有建立起来之前，实现这一想法会有很大的困难

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作者: lamprr    时间: 2010-1-18 12:01

楼主可以给出Haifan Lin 的文章么 想看看 谢谢

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作者: Yedan    时间: 2010-1-18 12:14

miRNA的chip data网上早就有了，但是miRNA的准确功能不是预测或chip数据就可以说明的，必须实验验证的。miRNA在iPS领域还很新，我现在的课题就是这个，有兴趣可以联系。4 y$ X2 X( [: _' n& ~
还有林海帆的那篇文章讲的是miRNA和三种干细胞的关系，不是iPS.

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作者: susanliuxue    时间: 2010-1-18 18:56

我现在也琢磨有关miRNA
# ?# g+ g' V6 n' @, y9 _4 S+ Q) P: x的问题，miRNA在iPS领域，还没有头绪。很苦恼
7 d  d+ F3 Z$ r  ~+ B实验不用特殊条件吧！

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作者: maxiaorongqp    时间: 2010-1-18 23:11

不是研究有MicroRNA的IPS了吗  还在设想干嘛 直接下文章就行了

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作者: freewangjianwei    时间: 2010-1-19 00:57

please see attachment

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作者: cdcliwei    时间: 2010-1-19 13:33

iPS的整个形成过程中表观调控元件和Micro RNA都有很重要的作用，但如果单从某一个角度来突破，看来还是有很多难度的。近日获悉国外有同行通过模拟干细胞分化不同阶段的生理环境，反向诱导iPS产生，摆脱了基因导入等问题的困扰，其结果还需拭目以待，但至少为大家提供了一种更为现实可行的思路，希望能给大家带来一些启示！

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作者: freewangjianwei    时间: 2010-1-19 16:22

回复 9# maxiaorongqp
+ I9 j3 A- N) ?4 M% B( D2 q8 Y1 y2 p1 C
thank you,' Q/ G; P) r) S: O# R
can you tell me the title of this paper?

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作者: freewangjianwei    时间: 2010-1-19 16:26

回复 11# cdcliwei & v5 w6 I) a( ^

4 q9 e7 z4 K1 e' T6 g( z* m* ^  S/ V9 ]2 G
    近日获悉国外有同行通过模拟干细胞分化不同阶段的生理环境，反向诱导iPS产生.
- B! j9 @3 `( L) n1 f- w1 L) I2 b% C4 ], Y/ X2 l, i  T2 _4 h! c
请问什么样的环境呢?酸碱度+细胞因子+O2%

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作者: syapxlg    时间: 2010-1-19 18:38

ESC和MEF表达显著差异的microRNA

,也许有问题，microRNA如何出MEF细胞发挥诱导作用,因microRNA很容易降解，这过程中起作用的可能还是细胞因子发挥的作用。
% l3 j; c0 B; c5 E- A饶老师说的对如何使microRNA进细胞是关键，脂质体或转染方法可行，但效率如何未知，有人做过但效果不好，不过也许是microRNA选的不对。

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作者: syapxlg    时间: 2010-1-19 18:41

不过按照microRNA的作用，用来诱导IPS应该是没问题的，只是方法问题！！！

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作者: 开心果王    时间: 2010-1-19 23:57

多谢分享资料！

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作者: decloud2009    时间: 2010-1-21 00:30

用miRNA的想法,我们讨论过..但是一个很大的问题,,1 q5 s+ f& u% g+ @8 c6 J( Y1 c

- P# V: M, P) o' R一个是它的起作用时间,,,血液或者细胞中可是存在很多酶的,,0 g9 Z! R; j- K2 ^( x5 n
另一个,如果它修饰了不能被降解掉..将来有一天我们不需要了又该怎么处理......

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作者: jessica.jr    时间: 2010-1-21 10:20

用mir-302经逆转录病毒表达诱导前列腺癌细胞成IPS的文章08年就发表了

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作者: msliyv    时间: 2010-1-21 10:21

miRNA用在iPS、ES cell differentiation中是不是更容易得到结果一些？

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作者: jessica.jr    时间: 2010-1-21 10:24

Lin S L,chang D C,chang-Lin S,et al.Mir-302 reprograms human skin cancer cells into a pluripotent ES-cell-like state,RNA,2008,14:2115-2124

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作者: zlightmiss    时间: 2010-2-1 15:01

回复 3# freewangjianwei * {5 ]# A# J7 y

* C" R/ i6 i+ T- f( N% c  ?" k" _$ A: P$ h( j; f6 `" `5 h
    这样的话RNA可能就更加不稳定了。

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作者: iyaofying888    时间: 2010-2-2 22:20

恩，想法很好，不过microrna在IPS的研究应用还不是很明朗呀

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作者: 可怜的孩子    时间: 2010-2-18 00:37

谢谢

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作者: he_liang    时间: 2010-2-22 11:55

:)谢谢分享

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作者: susanliuxue    时间: 2010-3-22 16:48

thanks for enjoying

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作者: ruochenzu    时间: 2010-3-25 11:12

见识了

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作者: hcluo    时间: 2010-3-25 15:50

好东东啊

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作者: wpcswy    时间: 2010-3-30 00:06

高明

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作者: wpcswy    时间: 2010-3-30 00:06

高明

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作者: wpcswy    时间: 2010-3-30 00:07

virus free or integration free应该是未来iPS技术发展及走向应用的方向

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作者: ouyi2738    时间: 2010-3-31 21:13

我觉得单纯用miRNA诱导ips还是有些困难的，毕竟它作用是抑制和降解mRNA。它能抑制控制分化的因子和多钱能性因子的抑制剂，我觉得很难单凭miRNA使内源多能因子的表达量达到能够逆转成体细胞的水平，08年NATURE BIOTECHNOLOGY 上好像有一篇用294替代c-myc的文章。我觉得可以将miRNA用在ES的建系上

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作者: qizhi502    时间: 2010-5-11 07:43

大家都是不谋而合，我也再一直琢磨，毕竟每个microRNA所包含的靶位点都成百上千个基因，而这成百上千个基因的所涉及的通路也很多，提高ips效率的文章是已经出了，但纯粹用其诱导ips确实很难，靶位点太多并且有很多都不确定，但是总感觉这是可行的，oct4也是很多基因的转录因子。本来细胞内的通路就是正态分布，而不是0-1二项分布，简而言之——“量”。

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作者: fguw    时间: 2010-5-14 05:12

Try first?

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作者: zsc78    时间: 2010-5-14 07:42

感觉很多人已经开始做了，赶紧行动吧。: N$ B1 L2 L% t
提供相关文献：[attach]7787[/attach]

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作者: fguw    时间: 2010-5-18 06:35

Nature Biotechnology：microRNA诱导iPS可提高干细胞安全性% Q7 _- ?2 ?& |- `8 q, z
美国加州大学旧金山分校的一组研究人员日前宣布，他们利用微RNA小分子取代一种可能致癌的转录因子，成功将实验鼠皮肤细胞转化为“诱导多功能干细胞(iPS细胞)”。相关论文发表在4月12日的《自然—生物技术》（Nature Biotechnology ）杂志网络版上。1 i5 q; Q$ i% T7 O+ d  r# q3 p2 n  ^1 e. T2 @  L
' n) k8 f4 B( i/ w" f
% @! o0 |4 e' h5 o1 viPS细胞是指体细胞经过基因“重新编排”，回归到胚胎干细胞的状态，从而具有类似胚胎干细胞的分化能力。科学家认为，这一技术将来有望用于培养完全不含病毒和外来基因的安全性更高的iPS细胞。5 L1 I0 K0 o9 |5 K0 f! g7 Z4 W( J6 w

. Q: z/ p6 b* V! B0 l) @6 U6 c3 Q6 P3 y对皮肤细胞进行“重排”使其成为iPS细胞涉及4种转录因子的表达。目前常用的方法是利用逆转录病毒作为载体将编码这4种转录因子的基因注入皮肤的成纤维细胞中，但其中3种转录因子可能诱发癌症，一定程度上限制了iPS细胞的应用前景。- r/ y% y% z1 T4 o2 i/ ^
! b! G( G/ i6 C3 T# z1 }2 s+ L/ x' U+ T& x
) b8 f. J5 O! T1 ]6 w0 H加州大学旧金山分校的科研小组尝试用微RNA分子取代其中一种转录因子，其他3种转录因子的基因仍由逆转录病毒载入。实验中，他们将微RNA混入油脂，使其可以顺利穿过成纤维细胞的细胞膜进入细胞中。$ L1 w9 w& Q" |6 a
! L( a5 c3 m5 ^3 C1 b; z8 S' I6 Z2 i' j+ w0 ^! L. C7 P2 `9 H7 k8 M' h
观察发现，微RNA可以替代转录因子发挥“诱导”功能，经过这种改造的实验鼠皮肤成纤维细胞可以分化为实验鼠所有类型的细胞。( g& e! L6 U7 v3 p0 ?  ~; ?. S9 D
) i/ y# |# F6 L, \3 s* {+ K1 m6 X2 F' y, _8 N3 n( Z: X
负责该项目的细胞生物学家罗伯特·贝尔洛克说：“利用类似微RNA小分子控制细胞的方法，在未来的干细胞生物学研究中将扮演重要的角色。”他们下一步的研究重点是破解微RNA在上述过程中发挥作用的机制，将来进一步开发出利用微RNA完全取代上述4种转录因子培养iPS细胞的方法
/ ~( [. k: r' W/ w( z% D+ {8 K# H: P8 t& w5 [$ ]; T; v6 R/ k+ c) }
0 V& i3 V- ~! T- P# `9 I# X! S( g0 f+ A5 z( v2 x5 i
2 q3 Z9 D# {& @/ O/ W1 ^, f) x1 W; y原始出处：( C6 G  \# [. ^0 \" b' O% q; J# q
! z( a4 T% l) k4 M2 x( n7 r' v, ]+ k5 z3 `0 q- {3 G, K3 ]* X/ O' Z: l; |4 [
Nature Biotechnology，doi:10.1038/nbt.1535，Robert L Judson，Robert Blelloch0 i- u9 B# T* N/ h9 x4 Q  C
$ P, T& J6 t% C5 S" u: N. i, B% ?6 D4 v" @* |5 F+ e, c) [
- s( a$ V; ~1 D# B$ hEmbryonic stem cell–specific microRNAs promote induced pluripotency
/ ^" c/ m6 X% i0 o2 I: e$ h3 W. C! U7 U1 O! S" d+ m% u* v% B3 D- O6 e, m( \/ w: j0 S, h& M
/ _0 k6 M# P  MRobert L Judson1, Joshua E Babiarz1, Monica Venere1 & Robert Blelloch1
6 T& J/ F! Y, d* x0 H7 U7 W/ Y0 p: A' A( e# q6 Z$ X' j- O3 R6 g# i, L+ J1 k' G' ^' t
( O* N# l$ q0 m0 }& @: Z8 oThis report demonstrates that introduction of microRNAs (miRNAs) specific to embryonic stem cells enhances the production of mouse induced pluripotent stem (iPS) cells. The miRNAs miR-291-3p, miR-294 and miR-295 increase the efficiency of reprogramming by Oct4, Sox2 and Klf4, but not by these factors plus cMyc. cMyc binds the promoter of the miRNAs, suggesting that they are downstream effectors of cMyc during reprogramming. However, unlike cMyc, the miRNAs induce a homogeneous population of iPS cell colonies.; {5 P. B9 P+ y$ V' d, |2 h
' Y* B, W3 X2 J! l+ o
2 U# j! H9 s5 z0 G/ D, n! f* H8 R( i6 KThe Eli and Edythe Broad Center of Regeneration Medicine and Stem Cell Research, Center for Reproductive Sciences, and Department of Urology, University of California, San Francisco, San Francisco, California, USA.

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作者: liulilin    时间: 2010-5-18 13:56

同志们  其实关于iPS的诱导机理还存在争议的，有人认为是重编程的，有人认为iPS是成体细胞本省固有的一种母细胞 是通过筛选出来的。此因这些机制并非确定的条件下去做 有两种结果，失败  或成功 并能进一步证明iPS的诱导机理。

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作者: qizhi502    时间: 2010-5-18 16:04

在各种的来源的ips的被诱导出来之后，’iPS是成体细胞本省固有的一种母细胞‘这个谬论不攻自破，ips是一种有效的重编程方法

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作者: FYH    时间: 2010-8-5 00:11

导入转录因子（Oct4、Sox2、Lin28和Naong）相应mRNA可将人成纤维细胞重编程为iPS细胞；Lin等仅用ES细胞特异性miRNA-302将人皮肤癌细胞重编程为ES细胞样多能干细胞；此外，导入ES细胞特异性miR-290家族的miR-291-3p、miR-294及miR-295(三者可替代c-Myc )或抑制仅在成体细胞大量表达的miR-let7均可提高iPS细胞生成效率.

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作者: tanguixiang    时间: 2010-8-31 15:23

预实验发现let-7c可以促进成纤维细胞MET现象，可以试试

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作者: 人在日本    时间: 2010-8-31 19:57

预实验发现let-7c可以促进成纤维细胞MET现象，可以试试
5 h- k& @* f! c% b5 j( L+ [tanguixiang 发表于 2010-8-31 15:23

( n6 X, U9 ]5 d

2 U! x6 ?# ], Z9 q: ~; F1 A  u7 N: _0 W0 T) G4 C; X5 {
    你说的预实验是自己做的还是文献报道的啊

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作者: weiyepan    时间: 2010-9-1 15:45

microRNA只能起一个促进作用，没有转录因子的加入，应该是不可能诱导成iPS的。
+ z' m( b7 y$ {) Z/ Z& d首先，在成体细胞里面，基因组很多转录因子的启动子区是被高度甲基化的，这些转录因子被抑制表达，因此，你没有起始的转录因子，是不可能起始iPS过程的。
2 [2 x  r( _) q5 r; U+ L其次，用miRNA只能起到阻断一些通路，起负调控的作用。根据我最近看的文章，阻断GATA6和Caspase-3都有促进细胞自我更新的潜能。但是，完全依靠miRNA来启动，还是不靠谱的。

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作者: yuguangju99    时间: 2010-9-1 18:21

有miRNA诱导的IPS了吗？现在有不少miRNA像let-7在干细胞维持和分化中起着关键作用。

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作者: aceman    时间: 2010-10-12 09:18

good idea

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作者: heather_lu    时间: 2010-10-25 20:58

日新月异啊，半年前的想法现在已经有人要完成了

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作者: Gemma    时间: 2011-5-16 12:44

正在啃microRNA诱导方面的文献。

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作者: huangcong1988    时间: 2011-5-16 20:44

Good idea ！！!但是好像已经有人研究了一些miRNA与ips相结合方面的问题，我有几篇文章，需要可以发过去

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作者: huangcong1988    时间: 2011-5-16 21:16

回复 Gemma 的帖子
6 m) X/ |2 e' K9 M3 ]4 N! m
! V( c- p, u. {7 F$ y! D你也做ips？还是只做miRNA?

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作者: huangcong1988    时间: 2011-5-16 21:18

回复 heather_lu 的帖子& K7 R8 B! e( D4 G( q6 o* p

, J& \0 Y2 n  }仁兄远见啊！！！这个想法我是刚看了国外一些人发的文章才想到滴，结果今天看来，你们半年前都已经想过了，看来我out了。。。

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作者: huangcong1988    时间: 2011-5-16 21:21

回复 weiyepan 的帖子
8 N" p" P0 I$ U8 I5 ?0 F3 L
* R- B1 z' X+ ^1 G9 y不是吧？我看的一些文章里面有miRNA促进ips细胞生成效率的，它并不一定是抑制对于ips生成有利的基因，它可能抑制对于ips生成有阻碍作用的基因，而且加miRNA，有可能抑制那些成瘤或者致癌基因的表达，这对于ips安全方面的研究作用不小

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作者: tony    时间: 2011-5-17 23:32

回复 freewangjianwei 的帖子
# i2 |* e0 ]: c* U, ?  k0 d/ F4 i& g% l- }4 Y) f. Y1 u+ r
在3月份的cell stemcell 上已经报道了只使用mir-302家族就可以诱导出IPS细胞，并且诱导效率很高。不过他们还是用的病毒表达载体。[img][/img]

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作者: xiphias    时间: 2011-9-27 14:54

非病毒载体的miRNA诱导ips文章也出来了啊。

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作者: 细胞海洋    时间: 2011-9-27 20:02

回复 xiphias 的帖子
: S7 J  d; u$ ^% o1 F. `8 \* Q4 M! e: Z
7 a$ _; O5 T) ?+ a7 g+ I: E看看这个帖子的时间) D( k" N0 J) P* E9 R( {
% h$ j$ p9 t/ a8 k+ q
好像比文章早半年呢9 f5 F2 X( s0 u$ ~/ f6 {

. _9 {! `: @* p! a% n5 M' n

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作者: vickyhouyu    时间: 2011-9-27 23:38

不是已经有用micro RNA诱导出ips cells的了么？ 这条路可行的！ 而且前景很好，各位同仁努力吧！9 n; G, E% A+ Y
:loveliness:

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作者: 细胞海洋    时间: 2011-9-28 00:10

回复 vickyhouyu 的帖子
: W1 @$ x% I) h: r9 T* h+ K) P6 ?4 ~8 @) k* s
看看这个帖子的时间' v- r) |" C1 Z5 V5 Y
; F# B1 v* f. X: J1 j  W8 }
好像比文章早半年呢
& g/ U5 ~% Y, a  Z

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作者: xiphias    时间: 2011-9-28 18:57

回复 细胞海洋 的帖子
# @/ B0 y2 e9 t& s* L! p) p1 n5 N" B. B/ {! J+ X
5月26号出的online文章说mature miRNA诱导iPS的文章啊

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作者: 细胞海洋    时间: 2011-9-28 21:43

回复 xiphias 的帖子
, T7 ^" Z/ g9 @+ Z0 {; Y' H, H% T4 D6 Q
这个帖子的时间是4 z4 o! u6 I! d

+ D8 s, n! t0 p# x6 Z9 h$ q2010-1-178 m% q* d# N0 |% A; G

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作者: lcw918    时间: 2012-12-22 15:22

想到就要下手啊

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作者: 卢小小    时间: 2013-1-7 16:36

把合成的RNA注射到细胞里，诱导

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