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标题: 间充质干细胞培养 [打印本页]

作者: bingo 时间: 2010-1-23 11:15 标题: 间充质干细胞培养

最近试验有点点不顺利，原因在于基本的细胞培养都会有这样那样的情况出现。我个人感觉是血清的问题。我们用的是国产的TBD血清，总会在培养时发现黑渣一样的东东，换液后会少，培养几天后又出现。请问大家这是什么东西？细胞碎片？细胞吐出的东东？还有用什么血清要好一些呢？课题资金有限，还不能太贵。谢谢大家了！！！

作者: angel-sakura 时间: 2010-1-23 11:19

无图无真相，建议上传图~~

作者: bingo 时间: 2010-1-23 11:26

好的，会尽快将图上传，谢谢大家！

作者: ziyunfei1982 时间: 2010-1-23 11:47

建议换好点的血清，实验不能将就，我用四季青的污染就一大片，最好用进口的

作者: ziyunfei1982 时间: 2010-1-23 11:49

黑东西是所谓的黑胶虫吧，应该是血清带入的，抗生素解决不了问题

作者: franklinhg 时间: 2010-1-23 12:45

以前用国产的血清经常遇到这种情况 . n K. n' E' s7 k e9 d& x
现在用HYCLONE的根本没有出现了; p' T: p' J5 p5 s! c5 _

国产的质量不怎么好建议用进口的实在不行就用兰州民海的也不错 ' g% d2 o/ }8 P- b( I
就是价格125元人民币/100ml 也不算贵的

作者: 大嘴鳄鱼 时间: 2010-1-23 20:21

你说的那种东西，估计就是黑胶虫，是血清中带来的，
不影响细胞的生长，而且有时候细胞长的好，它还反而多，建议换血清。

作者: dylm2000 时间: 2010-1-23 21:36

我也碰到类似问题，我用的是GIBOCO血清，不知什么原因，郁闷死了

作者: bingo 时间: 2010-1-24 14:54

先谢谢大家，如果是黑胶虫的话在高倍显微镜下应该能看到在动吧？有人说是做布朗运动，但个人认为足够小的分子都会做布朗运动，怎么个鉴定法是黑胶虫呢？如果的确是黑胶虫的话，培养室用不用做熏蒸呢？Thanks!

作者: hawkyiger 时间: 2010-1-25 09:03

首先，这应该是血清的影响。个人经验黑胶虫在高倍下呈蝌蚪状或杆状，而且是做旋转运动，并不是类似布朗运动；其次，黑胶虫在较低密度下对细胞影响不大，只有密度较高才会影响细胞生长；如果类似情况，可以更换血清。但8楼可能不知道，进口血清也有偷运进来的，而且很多，你可以通过查一下血清批号请懂行的人鉴定一下，这种血清在运输过程中会反复冻融，质量并不好。个人意见，仅供参考。

作者: bingo 时间: 2010-1-25 09:18

Thanks so much!!

作者: askage 时间: 2010-1-25 15:54

用胎牛血清吧，这些钱尽量不要省，免得重复性出问题

作者: bingo 时间: 2010-1-25 16:42

是用的胎牛的，还是优胎~~~估计是这个牌子不好吧，换个试试。O(∩_∩)O~

作者: angel-sakura 时间: 2010-1-27 11:09

回复 14# bingo 6 _/ {" x5 {7 w
我也用的是四季青的，也出现过这种情况，但我觉得是细胞碎片，重新传代后就没事了，细胞可能因为自身所处的环境不好，比如凋亡细胞释放的某些因子而导致其他细胞长不好，以此你可以先试试重新传代一下，不用等到长满70~80%，给细胞换个环境，顺便说一下，这种情况一般换液没办法解决，我试过了........9 S' Z) U7 I1 Z5 ]1 M) y F
总之，先确定是不是因为某些细胞死亡而导致的生长缓慢，然后再决定换不换血清，如果是前者的问题，即便你换了血清也没什么改善，这样不也是浪费了资金？~

作者: bingo 时间: 2010-1-27 11:21

细胞死亡后应该是漂起来吧，可是瓶子中并没有类似圆点的细胞啊，都贴着，就是长的慢，形态也不好。会不会有贴着牺牲的细胞？因为以前传代时发现有的怎么也消化不下来~

作者: hawkyiger 时间: 2010-1-27 11:49

回复 16# bingo

$ I$ f' \' w/ B) Z% F3 G( s
个人认为 MSC 细胞体型较大或老化后很难消化，一般体型较小且比较规则的细胞比较容易消化，因此在传代时可以舍弃。细胞死亡后无法继续贴壁，可以先传代换换环境试试，可以传的密点，不行再考虑其他原因

作者: bingo 时间: 2010-1-28 09:06

作者: liugy04@163.com 时间: 2010-1-29 12:27

黑胶虫一般可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，跟布朗运动不一样

作者: yuheng 时间: 2010-2-1 16:47

大家可能没考虑到另外一种情况：季节或者说温度对细胞的影响，前段时间养的细胞的确不好，最近好多了。相信大家也会如此，细胞越长越好！

作者: kqyy 时间: 2010-2-3 19:10

换点弄下

作者: helen841102 时间: 2010-2-3 23:30

季节会对细胞产生影响吗细胞可是在恒温的培养箱里啊

作者: missyoudad 时间: 2010-3-19 19:58

期待回答中

作者: bingo 时间: 2010-3-22 21:16

细胞是在孵箱中，温度以及CO2恒定，但随着季节的变化，细胞的生长速度似乎确实不同。我们细胞中的黑渣确认是培养基中所带，将培养基更换后情况好转，祝大家实验顺顺利利

作者: decloud2009 时间: 2010-3-24 00:36

建议血清使用前用0.22um的filter过滤。2 X0 c* m) }5 S8 Z

然后接种的时候密度大一点，这个东西，细胞生长的状态好。它就少，然后就是用pbs洗吧，勤快一点咯，反正是很难除去。。。。。。。

作者: askage 时间: 2010-3-25 11:04

我认为小黑点的组成有以下几种可能：9 J& j! X. i$ p& v8 S& Z+ c
1.破碎细胞的细胞核。细胞培养初期，细胞的大量凋亡，会使细胞核裂解出来，形成大量的小黑点。0 W# m4 Y3 G& k1 {6 C! |8 S
2.血清某些成分
3.上述两个方面的小黑点，在镜下都呈现不动状态，而一旦小黑点呈现出布朗运动，多数情况下，细胞都会迅速大批量的凋亡。在这种情况下，考虑是细胞受到污染，这种污染首先应该排除细菌，因为细菌的污染会使培养液变得很浑浊。那么，剩下的就考虑是衣原体或支原体感染。

作者: bingo 时间: 2010-3-25 13:26

回复 27# askage
谢谢！感觉您提到的前两点可能性极大~

作者: missyoudad 时间: 2010-3-30 00:41

xue xi le

作者: 2008天芳夜谈 时间: 2011-1-4 11:22

如果条件容许，你可以用STEM CELL的专门针对MSC 的血清

作者: athena1988620 时间: 2011-3-28 15:04

回复 bingo 的帖子

我前几天做的原代也有黑渣样物质，而且呈增多趋势，我用的是四季青的血清，不知道什么原因，不像是细菌污染，因为培养基还是很清亮的

作者: lkzjyx 时间: 2011-6-6 23:56

应该是细胞分泌的东西吧有可能是胞质颗粒记得看文献时有图片解释过的

作者: ytumuyangren 时间: 2011-6-7 11:07

我们在养MSC的时候，在加入血清之前都要过滤一下，没有出现你说的很脏的情况，你可以尝试一下。

作者: 1301918986 时间: 2011-6-7 11:44

建议上传图像看看

作者: cheese 时间: 2011-6-7 23:09

可能就是所谓的黑胶虫，是血清中带的，可以换一下血清试试，我原来也出现过这种情况。

作者: 湖南干细胞 时间: 2012-11-5 20:38

回复 dylm2000 的帖子6 K) N5 }1 ]5 m U

我用国外的血清，也碰到类似问题，细胞杂质多，黑点遍布，但是培养基布混浊，不知道什么原因：污染还是？

作者: 湖南干细胞 时间: 2012-11-5 20:40

回复 angel-sakura 的帖子
) B+ m& w: S6 K! X* D; U2 O; m- m
值得借鉴，确实不能一概而论。我要分析一下原因。

作者: 湖南干细胞 时间: 2012-11-5 20:43

回复 askage 的帖子

你的说法比较全面，以前我师兄也是这么分析的。不知道文献中的资料有没有分析这方面的？

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