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标题: 间充质干细胞培养 [打印本页]

作者: bingo    时间: 2010-1-23 11:15     标题: 间充质干细胞培养

最近试验有点点不顺利,原因在于基本的细胞培养都会有这样那样的情况出现。我个人感觉是血清的问题。我们用的是国产的TBD血清,总会在培养时发现黑渣一样的东东,换液后会少,培养几天后又出现。请问大家这是什么东西?细胞碎片?细胞吐出的东东?还有用什么血清要好一些呢?课题资金有限,还不能太贵。谢谢大家了!!!
作者: angel-sakura    时间: 2010-1-23 11:19

无图无真相,建议上传图~~
作者: bingo    时间: 2010-1-23 11:26

好的,会尽快将图上传,谢谢大家!
作者: ziyunfei1982    时间: 2010-1-23 11:47

建议换好点的血清,实验不能将就,我用四季青的污染就一大片,最好用进口的
作者: ziyunfei1982    时间: 2010-1-23 11:49

黑东西是所谓的黑胶虫吧,应该是血清带入的,抗生素解决不了问题
作者: franklinhg    时间: 2010-1-23 12:45

以前用国产的血清 经常遇到这种情况 . n  K. n' E' s7 k  e9 d& x
现在用HYCLONE的 根本没有出现了; p' T: p' J5 p5 s! c5 _

% O8 @; N6 Y( m6 U7 Y5 ^8 ^, j/ x国产的质量不怎么好 建议用进口的 实在不行就用兰州民海的也不错 ' g% d2 o/ }8 P- b( I
就是价格125元人民币/100ml 也不算贵的
作者: 大嘴鳄鱼    时间: 2010-1-23 20:21

你说的那种东西,估计就是黑胶虫,是血清中带来的,
5 y5 c3 v. w3 s- w! j: j不影响细胞的生长,而且有时候细胞长的好,它还反而多,建议换血清。
作者: dylm2000    时间: 2010-1-23 21:36

我也碰到类似问题,我用的是GIBOCO血清,不知什么原因,郁闷死了
作者: dylm2000    时间: 2010-1-23 21:36

我也碰到类似问题,我用的是GIBOCO血清,不知什么原因,郁闷死了
作者: bingo    时间: 2010-1-24 14:54

先谢谢大家,如果是黑胶虫的话在高倍显微镜下应该能看到在动吧?有人说是做布朗运动,但个人认为足够小的分子都会做布朗运动,怎么个鉴定法是黑胶虫呢?如果的确是黑胶虫的话,培养室用不用做熏蒸呢?Thanks!
作者: hawkyiger    时间: 2010-1-25 09:03

首先,这应该是血清的影响。个人经验黑胶虫在高倍下呈蝌蚪状或杆状,而且是做旋转运动,并不是类似布朗运动;其次,黑胶虫在较低密度下对细胞影响不大,只有密度较高才会影响细胞生长;如果类似情况,可以更换血清。但8楼可能不知道,进口血清也有偷运进来的,而且很多,你可以通过查一下血清批号请懂行的人鉴定一下,这种血清在运输过程中会反复冻融,质量并不好。个人意见,仅供参考。
作者: bingo    时间: 2010-1-25 09:18

Thanks so much!!
作者: askage    时间: 2010-1-25 15:54

用胎牛血清吧,这些钱尽量不要省,免得重复性出问题
作者: bingo    时间: 2010-1-25 16:42

是用的胎牛的,还是优胎~~~估计是这个牌子不好吧,换个试试。O(∩_∩)O~
作者: angel-sakura    时间: 2010-1-27 11:09

回复 14# bingo 6 _/ {" x5 {7 w
我也用的是四季青的,也出现过这种情况,但我觉得是细胞碎片,重新传代后就没事了,细胞可能因为自身所处的环境不好,比如凋亡细胞释放的某些因子而导致其他细胞长不好,以此你可以先试试重新传代一下,不用等到长满70~80%,给细胞换个环境,顺便说一下,这种情况一般换液没办法解决,我试过了........9 S' Z) U7 I1 Z5 ]1 M) y  F
总之,先确定是不是因为某些细胞死亡而导致的生长缓慢,然后再决定换不换血清,如果是前者的问题,即便你换了血清也没什么改善,这样不也是浪费了资金?~
作者: bingo    时间: 2010-1-27 11:21

细胞死亡后应该是漂起来吧,可是瓶子中并没有类似圆点的细胞啊,都贴着,就是长的慢,形态也不好。会不会有贴着牺牲的细胞?因为以前传代时发现有的怎么也消化不下来~
作者: hawkyiger    时间: 2010-1-27 11:49

回复 16# bingo
$ B/ Z' H8 z( n, `! o
$ Q. _/ Z8 V9 Y' a2 {: b/ ]3 a$ I$ f' \' w/ B) Z% F3 G( s
  个人认为 MSC 细胞体型较大或老化后很难消化,一般体型较小且比较规则的细胞比较容易消化,因此在传代时可以舍弃。细胞死亡后无法继续贴壁,可以先传代换换环境试试,可以传的密点,不行再考虑其他原因
作者: bingo    时间: 2010-1-28 09:06

OK
作者: liugy04@163.com    时间: 2010-1-29 12:27

黑胶虫一般可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,跟布朗运动不一样
作者: yuheng    时间: 2010-2-1 16:47

大家可能没考虑到另外一种情况:季节或者说温度对细胞的影响,前段时间养的细胞的确不好,最近好多了。相信大家也会如此,细胞越长越好!
作者: kqyy    时间: 2010-2-3 19:10

换点弄下
作者: helen841102    时间: 2010-2-3 23:30

季节会对细胞产生影响吗 细胞可是在恒温的培养箱里啊
作者: missyoudad    时间: 2010-3-19 19:58

期待回答中
作者: bingo    时间: 2010-3-22 21:16

细胞是在孵箱中,温度以及CO2恒定,但随着季节的变化,细胞的生长速度似乎确实不同。我们细胞中的黑渣确认是培养基中所带,将培养基更换后情况好转,祝大家实验顺顺利利
作者: bingo    时间: 2010-3-22 21:16

细胞是在孵箱中,温度以及CO2恒定,但随着季节的变化,细胞的生长速度似乎确实不同。我们细胞中的黑渣确认是培养基中所带,将培养基更换后情况好转,祝大家实验顺顺利利
作者: decloud2009    时间: 2010-3-24 00:36

建议血清使用前用0.22um的filter过滤。2 X0 c* m) }5 S8 Z

. x" g# L# B4 t# d3 U然后接种的时候密度大一点,这个东西,细胞生长的状态好。它就少,然后就是用pbs洗吧,勤快一点咯,反正是很难除去。。。。。。。
作者: askage    时间: 2010-3-25 11:04

我认为小黑点的组成有以下几种可能:9 J& j! X. i$ p& v8 S& Z+ c
1.破碎细胞的细胞核。细胞培养初期,细胞的大量凋亡,会使细胞核裂解出来,形成大量的小黑点。0 W# m4 Y3 G& k1 {6 C! |8 S
2.血清某些成分
3 [- o$ c) D0 \+ i- S3.上述两个方面的小黑点,在镜下都呈现不动状态,而一旦小黑点呈现出布朗运动,多数情况下,细胞都会迅速大批量的凋亡。在这种情况下,考虑是细胞受到污染,这种污染首先应该排除细菌,因为细菌的污染会使培养液变得很浑浊。那么,剩下的就考虑是衣原体或支原体感染。
作者: bingo    时间: 2010-3-25 13:26

回复 27# askage
% e. D5 `8 Q1 N4 K5 _谢谢!感觉您提到的前两点可能性极大~
作者: missyoudad    时间: 2010-3-30 00:41

xue xi le
作者: 2008天芳夜谈    时间: 2011-1-4 11:22

如果条件容许,你可以用STEM CELL的专门针对MSC 的血清
作者: athena1988620    时间: 2011-3-28 15:04

回复 bingo 的帖子
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* _  L, z9 k' t) T% P; J我前几天做的原代 也有黑渣样物质,而且呈增多趋势,我用的是四季青的血清,不知道什么原因,不像是细菌污染,因为培养基还是很清亮的
作者: lkzjyx    时间: 2011-6-6 23:56

应该是细胞分泌的东西吧  有可能是胞质颗粒  记得看文献时有图片解释过的
作者: ytumuyangren    时间: 2011-6-7 11:07

我们在养MSC的时候,在加入血清之前都要过滤一下,没有出现你说的很脏的情况,你可以尝试一下。
作者: 1301918986    时间: 2011-6-7 11:44

建议上传图像看看
作者: cheese    时间: 2011-6-7 23:09

可能就是所谓的黑胶虫,是血清中带的,可以换一下血清试试,我原来也出现过这种情况。
作者: 湖南干细胞    时间: 2012-11-5 20:38

回复 dylm2000 的帖子6 K) N5 }1 ]5 m  U

& v  z( Y: ~' X8 P) n) G我用国外的血清,也碰到类似问题,细胞杂质多,黑点遍布,但是培养基布混浊,不知道什么原因:污染还是?
作者: 湖南干细胞    时间: 2012-11-5 20:40

回复 angel-sakura 的帖子
/ F! H4 P. @0 E! T9 Q2 W+ k) B+ m& w: S6 K! X* D; U2 O; m- m
值得借鉴,确实不能一概而论。我要分析一下原因。
作者: 湖南干细胞    时间: 2012-11-5 20:43

回复 askage 的帖子
" C/ B$ E4 a# ^- N
0 p( P- N+ P& l6 P% @. O你的说法比较全面,以前我师兄也是这么分析的。不知道文献中的资料有没有分析这方面的?




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