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标题: 求助：干细胞老化了 [打印本页]

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作者: icesnow    时间: 2010-1-23 22:48     标题: 求助：干细胞老化了

在实验室养好了干细胞，6代了，还没病毒转染，发现有老化了，请教有没有解决办法啊, M9 u% x  u4 l% Z

# J2 }7 S  ]7 T1 G. {$ e2 Y/ A还有个问题：要转染三种病毒，不知道有人有没有这类经验，三种病毒转染后能否同时三种病毒细胞的纯化
, w. @& t5 m; L( z3 \" V$ C, e
0 n  j5 `; X, V多谢

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作者: gemstone    时间: 2010-1-24 01:25

如果细胞老化了，说明你的干细胞已经分化。同时进行三种病毒转染，如果需要筛选出三种病毒同时转染的细胞，就必须用三种不同抗性的质粒，这样同时加入三种药物进行筛选。你可以查一下invitrogen应该有这种质粒，只需要更换抗性片段。

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作者: icesnow    时间: 2010-1-24 21:40

回复 2# gemstone
8 Z- a. g" \1 \
% S. }* Y8 ^: m+ E7 ]0 ~! h5 L/ a- F& i) ^
    多谢斑竹，干细胞分化了是不是意味着要重新培养了啊
$ |4 E$ n4 n( p- i现在三种质粒已经买到，不知道同时用三种抗生素筛选的话对干细胞有没有影响
+ D3 e8 e5 o) V8 ?. e
$ w8 ?" S8 H+ u8 ]- i" {谢谢

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作者: franklinhg    时间: 2010-1-25 16:52

严格来说 抗生素的影响应该是有的 但是这个都是可以忽略的 毕竟你关心的不是抗生素对细胞的影响 而是你的目的基因对细胞命运的影响，着眼点不同。毕竟很多事件不是单因素事件。

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作者: ziyunfei1982    时间: 2010-1-25 21:11

什么干细胞啊？老化的这么快

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作者: franklinhg    时间: 2010-1-26 00:40

似乎是体型越大的动物，其干细胞越不容易衰老；体型越小的，反而易衰老。转染操作却相反，体型越小的，越好转进去，越大的，越不好转进去。

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作者: 双刀    时间: 2010-1-27 17:01

回复 3# icesnow
& N$ c( s8 c+ f+ D$ y/ |$ {
% R3 V7 L7 n3 g+ O! x* P, D, L: K我觉得你重新培养一下吧。 否则分化成什么细胞了也不知道。你也可以鉴定一下是不是你想要的细胞

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作者: xionghao508    时间: 2010-1-27 22:18

我们用的是国产的血清和抗生素，这个对干细胞的分化影响大吗？

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作者: hawkyiger    时间: 2010-1-28 08:38

回复 8# xionghao508
- u5 s) n8 O& _" R) I' M- d
% ~, `2 ~0 e* Q. Q  x2 W
. U0 O% [+ i- |* F6 J  @3 j! F    血清在干细胞生长中影响很大，所以尽量选用优质血清。

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作者: have-a-rest    时间: 2010-1-28 23:04

6代？老化？
# \) w: e: \0 r! T! N是干细胞吗？怎么鉴定的？凭什么说老化了？

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作者: icesnow    时间: 2010-1-29 08:58

回复 7# 双刀 5 T! G! ?( G- E3 a! v, U0 `2 u# P
) \1 ]- y6 N) Y# k, Z

/ D7 S9 j4 |# Y    我们需要的就只是干细胞，已经复苏了一瓶新的，也换了hycolon血清，现在看细胞总是长势不是太好，是不是与冰冻有关，已经复苏三天了还没长满25培养瓶. j4 _. b$ d3 G' M/ ?! v
/ S: S) I) c* {$ t: I! m
现在又出现了新的问题了，用的hycolon的dmem和血清，换液一加进去就变碱性了，在瓶子里就没事

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作者: icesnow    时间: 2010-1-29 09:03

回复 8# xionghao508 & N& V$ f4 D' y; @6 D9 X8 y
* f6 [. S* R( J& F' T
0 I! K' c! Z5 C. i: |4 Z
       我们这干细胞中心说国产的都不行，四季青的就是糟蹋干细胞，hycolon的也只是可以，那边推荐用invitrogen的

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作者: have-a-rest    时间: 2010-1-29 09:22

先说说你的是什么干细胞，是不是鉴定和公开发表了的。1 D' |" S7 Q" n+ p: g8 b
还是你们自己建的干细胞系？! }4 f+ V  n4 T- a' {$ {
无论如何，总有个参考培养流程吧。8 J! h( i- v' `5 e2 D. H
问题写清楚了，大家才可以给你建议。
; n* Q4 u* Z: V" o( C1 ^, D关于血清、培养基，既然选择了这个课题，就不要吝惜money。

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作者: sleevexz    时间: 2010-1-29 18:05

哺乳动物胚胎干细胞对血清的品质要求比较高，不知你培养的是什么干细胞

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