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标题: ips细胞产生问题？ [打印本页]

作者: ahfjwangrui 时间: 2010-1-26 21:41 标题: ips细胞产生问题？

请教各位专家一个问题，在将四种转录因子导入成熟细胞时，是用在一个载体上连接四种因子的基因片段，还是一个因子一个载体，/ E2 j& B b. L! }' A9 v t- n- f
如果是前者，插入的片段会不会超过有些载体的负荷，1 \$ e' g& {/ o; T# `' H2 R2 [
如果是后者，如本人用慢病毒载体，会不会各个因子载体在整合进宿主细胞时，发生竞争抑制呢？
谢谢！

作者: 张也行 时间: 2010-1-26 21:58

一般不都是将四个基因分别连到载体上，然后导入吗？四个连一块，太大了吧。一般的启动子也没那么强吧。

作者: treestem 时间: 2010-1-26 21:59

这两种情况都有，最初用四个因子四个载体，如：反转录病毒，慢病毒；之后用四个因子一个载体，如：piggyBac

作者: treestem 时间: 2010-1-26 22:07

还有就是最近，麻省理工的Rudolf Jaenisch与他的哈佛大学的Konrad Hochedlinger将4个转录因子放在同一段DNA上，即放在一个表达盒（cassette）上。在抗生素土霉素的筛选下，成功插入宿主细胞基因座的表达盒开始表达4个转录因子，促使宿主细胞转化为诱导多能干细胞。$ a! R2 W& ~1 ^8 \: ^/ A
这个方法的优点是：4个重组因子被包裹在一个表达盒中，并能被准确地插入预先设计好的基因座上，解决了不确定转录因子定位基因组哪个位置上的问题。
我们论坛上也给出了相应的全文http://www.stemcell8.cn/thread-16279-1-1.html

作者: treestem 时间: 2010-1-26 22:11

至于楼主提到的"超过有些载体的负荷""发生竞争抑制"还没有在文献中看到，因为这些方法都是有实验室做过了，而且在再程序化过程中都证明是可行的，所以可能不存在你担心的问题吧，一家之言~希望大家广泛讨论啊

作者: 双刀 时间: 2010-1-26 22:16

有些是四个载体分别一个因子。不过也有人是把三个因子连到一个载体上，然后还有一个因子是一个载体。如果是四个因子一个载体，要关注其大小问题。

作者: lingren 时间: 2010-1-27 08:43

四个因子肯定是很大，6K左右吧，组合到一个载体上肯定会影响那个表达效率！单独四个因子分别转，存在随机问题，如果不是创新，建议用传统办法

作者: feifa1314 时间: 2010-1-29 09:37

问题是这四个因子进入细胞后，翻译出来的蛋白量难以估计，也就存在四个因子之间的平衡问题；
分开包装的话，可以控制相应的病毒量，使得四个因子的病毒量有个大致的平衡。
我觉得，这四个因子之间肯定存在一个平衡态，达到平衡台的话，就会启动细胞从普通细胞向胚胎干细胞的质的转变。否则，就难以启动，或者说，即使启动了也不能完全。

作者: decloud2009 时间: 2010-1-30 01:51

楼上讲得很有道理，，

作者: tieyun 时间: 2010-2-2 21:19

有没有文章比较过单独转和整体转的差异啊？谢谢~~

作者: baichunyu 时间: 2010-2-3 21:40

应该是根据片段大小选择是否选择一个或多个载体

作者: jimzhua 时间: 2010-2-15 18:53

回复 1# ahfjwangrui

现在可以买到已连好的病毒质粒 addgene

作者: 不倒翁 时间: 2010-3-5 12:57

单独转和一起转都有人做过，单独转因为要四个基因一起转进去所以效率很低，然后就有人想到放在一个载体上了

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