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标题: ips诱导因子问题？ [打印本页]

作者: ahfjwangrui 时间: 2010-1-28 09:51 标题: ips诱导因子问题？

急求：各位专家，请帮帮小弟忙，我想获取产生ips细胞的转录因子基因，但是设计的引物不知道是应该针对mRNA反转的cDNA，还是针对cDNA中的一段即，CDS段，
我听人说CDS就可以编码蛋白了，做过这方面的专家们，你们是怎么做的？万分谢谢！

作者: ghfvcat 时间: 2010-1-28 10:17

你要做什么用？一般都是CDS 吧，其它辅助序列表达载体上都有的

作者: baichunyu 时间: 2010-1-28 10:22

你设计引物应该这对cDNA，但是你要确定你所扩的序列准确序列，也就是你要确定出这段基因的目的片段，准确的功能区域

作者: ruanyao57 时间: 2010-1-28 10:36

CDS即可，不要poly（A）。

作者: ahfjwangrui 时间: 2010-1-28 11:03

有做过的人吗？你们出来说个话吧，谢谢

作者: ghfvcat 时间: 2010-1-28 11:31

回复 5# ahfjwangrui

问题是你要做什么用？构建重组病毒，还是做蛋白表达？载体是什么样的，载体上带着什么？

作者: ahfjwangrui 时间: 2010-1-28 13:00

是做蛋白表达的，我的目的要在细胞内表达四种转录因子蛋白

作者: ghfvcat 时间: 2010-1-28 14:18

回复 7# ahfjwangrui + Y) ?# s: g2 |9 W' \
6 y$ ~ b3 B! v3 Z
( q/ R- h9 ^* m8 S
是在真核细胞里面么？用的什么载体啊，cDNA包含编码区，先导序列以及后续序列等，一般的这些表达常用的序列在载体上都是有的，只要把CDS插进去就可以表达了; K7 C/ i4 P! A1 u- i# H' s" Q
一点浅见，如有不周之处，还望指正

作者: qizhi502 时间: 2010-1-28 14:29

addgene 上有各种因子质粒

作者: ghfvcat 时间: 2010-1-28 15:00

回复 9# qizhi502
8 Z: m/ f8 @2 }1 I

版主，你买过么？能不能指教一下购买流程？关键是那个进口许可怎么申请？

作者: sunyucheng 时间: 2010-1-29 21:24

回复楼上！这个公司代理！或找上海易宝生物，Google一下就能找到该公司的联系方式，我已经联系了,tamen hu[attach]4021[/attach][attach]4022[/attach]

作者: sunyucheng 时间: 2010-1-29 21:27

回复 10# ghfvcat [attach]4023[/attach]

作者: liangyinxie 时间: 2010-1-30 09:30

购买吧

作者: qizhi502 时间: 2010-1-30 12:30

回复 10# ghfvcat
买这个需要进出口证明好像，不过我没买过。最好还是向合作实验室要

作者: ahfjwangrui 时间: 2010-1-31 23:53

不好意思，我没买过，正在向一个公司申请代理，不知道能否下来

作者: ghfvcat 时间: 2010-2-1 09:53

回复 11# sunyucheng & T8 }& T7 k; h j3 f) U- ~
( n! u( Y" I/ K" S

易宝不行，基本上不卖了

作者: zlightmiss 时间: 2010-2-1 14:27

回复 11# sunyucheng

) k/ S% s7 n1 O. O: o
好人啊。

作者: zlightmiss 时间: 2010-2-1 14:45

回复 8# ghfvcat ' l6 I6 n% n: B" L) x8 F3 Q, N
7 z6 u! w; `* W9 M& ]
7 t0 F8 h; R; |6 u3 F4 X, }
受教了，谢谢！

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