干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 细胞转染要注意的问题 [打印本页]

作者: ligangcw 时间: 2010-1-29 12:32 标题: 细胞转染要注意的问题

细胞转染要注意的问题欢迎大家讨论

作者: liugy04@163.com 时间: 2010-1-29 12:53

也打算做RNAi的细胞转染，用电转和脂质体的较多，持续关注

作者: 细胞海洋 时间: 2010-1-29 13:47

利用搜索 “转染” 在论坛有很多这方面的帖子看看有没有帮助

作者: ligangcw 时间: 2010-4-16 13:11

尤其稳定转染及筛选，我搞了几个月了一点进展也没有，还望不吝赐教！

作者: icesnow 时间: 2010-4-22 16:17

楼主是遇到了什么问题了，我也在坐干细胞稳定转染，用的慢病毒，有问题可以一起讨论

作者: ligangcw 时间: 2010-4-22 16:41

转染之后六到七天细胞就死光光了，根本不用等到十四天的单克隆出现

作者: ahua 时间: 2010-4-22 20:17

jiayou，细胞转染很棘手，望有经验者不吝赐教。谢谢

作者: cony 时间: 2010-4-27 00:30

关注，我也要做转染

作者: hljzyydx 时间: 2010-5-9 20:26

要注意的问题很多啊。。# r6 ~8 T1 ^- T! E( b5 r1 @
第一：转染试剂的选择（现在最常用的应该就是Lipo2000；当然，如果是电转或者其他方法就另说了）不同的转染试剂的转染效率和要求是不一样的，比如转染前培养液中是否可以含有双抗等。也可以视你的实验要求，选择特定的转染试剂
第二：转染时对照的设定，转染是一种可以拿到直接数据的实验，所以对照的设定必须严格，我一般设阴性，阳性和空白对照，这也是要视具体实验而定的
第三：转染条件的摸索，转染试剂说明书上给定的条件不一定适合你的实验，所以实验前一般要自己摸条件，找出最佳转染条件，这个是必须的
第四：污染的控制，这个无需多言，细胞实验都是要注意的，但转染更应注意，原因很简单，试剂很贵，因为这个影响了结果的话，冤死。! b6 f+ q1 G6 W( {

大概就这些吧，其他的可能还有一些细节，想起来了再补充，希望对你有帮助

作者: zhengds 时间: 2010-6-17 17:00

个人认为
1：首先要对自己要转染的细胞做一个G418的抗性标准曲线，找到合适的浓度，不要直接拿别人的药物浓度，很多都是不适用的，特别是文章里的，不要信，要针对自己的细胞自己摸一个，事半功倍。
2：对于细胞系的选择，要尽量多搞几个不同的细胞系，我们做同源重组，有的细胞系就是不出阳性的，有的就很容易，所以有可能是不同细胞之间的微小的差别造成实验失败，一定不要拿一个细胞死做，可能会死的很惨
3:转染的质粒多做几个不同的浓度( c$ G9 }' }! R! w! v3 J; V
4，转染前细胞一定要长到80%汇合

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)