干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 请教脐带干细胞传代后不生长的原因？ [打印本页]

作者: wshzhoum 时间: 2010-2-2 10:04 标题: 请教脐带干细胞传代后不生长的原因？

2天前把一瓶P2的脐带间充质干细胞在胰酶0.25%，1ml 在孵育箱中消化1min，然后弃胰酶吹打成悬液，平分至两瓶。。。。昨天观察有一瓶细胞生长及细胞密度都很好，另一瓶却都未贴壁，换液后仍有大量细胞贴附于瓶壁，形态却是圆形。。。。这是什么原因造成的？, ]4 N5 G" ^  o; V# J9 t
   希望高手能指点迷津，两个培养瓶都为新瓶$ e. K( u. M# s. @
   感激涕零！

作者: 细胞海洋 时间: 2010-2-2 10:10

建议你上传图片，更直观，大家也更好判断

作者: yuheng 时间: 2010-2-2 10:15

两瓶培养条件完全一样么？

作者: 军医 时间: 2010-2-2 10:30

圆形细胞是不是刚贴壁没铺开呀？

作者: 碧海蓝天 时间: 2010-2-2 11:09

可能你的胰酶作用时间太长了，估计再长也不会贴壁。下次传的时候不用放到孵箱里，镜下控制时间。

作者: hawkyiger 时间: 2010-2-2 11:32

首先得问一下你这两瓶如果相同操作的话结果不同原因是什么，你是分至两个新瓶中还是一半保留在老瓶中，另一半保留在新瓶中，如果后者的话可能是原因之一。另外MSC开始贴壁是圆形，过一段时间伸展成纺锤形，但还是把图片上传看看较好，比较直观

作者: baichunyu 时间: 2010-2-2 19:29

原因一：可能是胰酶消化时间过长，消化不用在培养箱内，加上胰酶可在显微镜下观察，见细胞变圆即可吹打或拍打培养瓶瓶壁；原因二：如果你一瓶分两瓶，是不是一半保留在原瓶子里，长起来的的是原瓶子的，另外那个没有长？？？

作者: wshzhoum 时间: 2010-2-3 09:27

回复 3# yuheng ! N9 }' E: \+ q# S0 y3 k

两瓶的生长条件完全一样。。。而且全是新瓶。。。

作者: wshzhoum 时间: 2010-2-3 09:29

回复 4# 军医 ' ^7 i/ T9 y" W% t, o
) G( c. L! I, @

一开始也认为是这样。。。今天去观察细胞发现大量漂起。。。已经都死了~

作者: yuheng 时间: 2010-2-3 13:26

回复 8# wshzhoum
. X* \8 F# K+ L# l
瓶子用的什么牌子的？还有你是怎么分的？是在一个管里离心完用完全培养液重悬了等分为两份么？

作者: hawkyiger 时间: 2010-2-8 10:20

本帖最后由细胞海洋于 2013-2-6 10:37 编辑 0 L5 k" V5 y& G9 l( d" S% }0 a
) c- H0 o! l4 s8 V# o4 I3 M# v! Y
我也是养脐带MSC的，请问你是哪里的，方便的话可否交流一下，

作者: 清影 时间: 2010-11-5 17:28

如果两瓶生长条件一样的话，排除了消化的问题，即使有影响，第二瓶也不会出现目前这种情况。之前接种时有包被瓶子么？包被时间和包被液量都控制的一样么~~

作者: mania7041 时间: 2013-2-5 17:17

大侠可不可以仔细说下胰酶消化的过程，我最近被胰酶搞惨了，貌似总是找不到关键点，胰酶消化拍早了有没有影响啊

作者: 细胞海洋 时间: 2013-2-6 10:38

回复 mania7041 的帖子

你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样) _, D+ @; D! W8 a6 n/ t0 C& C: D, a
; m6 i' X# K3 l6 a# t9 ]3 o
否则他会看不到

作者: 孙帅帅 时间: 2013-2-6 16:49

培养条件没有改变而细胞生长却明显变缓、细胞内颗粒明显增多，生长减缓有中毒表现，但是培养液多不发生浑浊，即可考虑支原体污染！

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)