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脐血中的造血干细胞和单个核细胞PBMC是一个东西吗？
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作者:
jiuxuya
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2018-4-8 13:24
标题:
脐血中的造血干细胞和单个核细胞PBMC是一个东西吗？
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分离脐血中用羟乙基淀粉分离所谓的有核细胞（或细胞得率）是不是就是造血干细胞？那这两个东西和血液中用FIOCOLL分离的单个核PBMC是不是也是一个东西呢？
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baby00000003
时间:
2018-4-8 14:24
其中有一部分是造血干，就流式结果而言大约0.1%吧～因为分系培养能形成BFU-E、CFU-GM、CFU-GEMM
7 b& X' T; p( ~ {/ M
PBMC如果不是专门动员过的话......可以认为没有造血干吧，就是字面意思上的MC，培养出来的只有各种淋巴细胞神马的
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jiuxuya
时间:
2018-4-8 16:38
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baby00000003
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- k/ M; C8 Z/ }9 y
: c9 r2 _( b& J3 a
您的意思是脐血中的造血干跑流式大概只有0.1%？有这么低，那存脐血以后治疗白血病那能有用吗？
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另外您说的专门动员过是什么意思？打针什么的吗？
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随时准备下线
时间:
2018-4-9 08:11
动员是指使用药物促使骨髓中的造血干细胞释放到外周血中
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fenglinzhu
时间:
2018-4-9 09:12
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baby00000003
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7 r7 |6 k N/ y
! X5 R: S( k6 E- `% [
外周血单个核细胞（Peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)即外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。即非骨髓血中的单核造血干细胞。你好像理解错MC的意思了
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fenglinzhu
时间:
2018-4-9 09:24
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jiuxuya
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" n5 B3 q5 [3 F% t
: x9 V1 @" X' l4 w6 W
用羟乙基淀粉分离50ml脐血，然后用红细胞裂解液裂解，平均计数得2*108个细胞。
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骨髓移植所需要的CD34+（造血干）细胞量为2*106/kg，脐血一般情况下只能满足10岁以下，体重不超过30kg的患者使用，按30kg算的话，一般情况下CD34+细胞大概有6*107个，占所有有核细胞的33%左右。
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不用红细胞裂解液裂解的情况下会有很多红细胞，没做过具体的计算。
! ]# A6 f$ z5 F$ s
以上是我最近做的10次羟乙基淀粉分离脐血的平均数据。
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jiuxuya
时间:
2018-4-9 11:48
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fenglinzhu
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+ M* n; e7 W4 L$ f' Y
: T) `+ K7 [5 y; k) x+ s
非常感谢您的宝贵数据，我最近再研究修改工艺，准备应用两步法分离脐血中单个核细胞，包括您这个有核细胞数目，大概就是先羟乙基然后再用FICOLL来分离，您觉得这样会不会比您只用HES得到更多的有核细胞呢？
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jiuxuya
时间:
2018-4-9 13:14
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9 E+ ~- v4 j. @6 F% ?) R# A2 ]" {
+ m7 b4 C1 z% t1 H* {% x b1 J
明白，谢谢，那一般什么时候用动员呢？如果要是采血做免疫细胞的话用不用做动员呢?
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baby00000003
时间:
2018-4-9 13:46
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fenglinzhu
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% S# f; n+ E& C% a, J
- S, X' ?% `% k8 Y6 z5 ?6 n% Q
https://en.wikipedia.org/wiki/Peripheral_blood_mononuclear_cell
( p- B4 Z" u5 Y2 Y
我英语不好，麻烦你受累给翻译下行不？连同monocyte的二级查找一起哈～
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fenglinzhu
时间:
2018-4-9 14:31
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jiuxuya
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/ X i; _/ ^* T0 [% V
9 j. n# C. W/ M* ?
灏洋的羟乙基推荐的使用方法就是羟乙基+FIOCOLL分离，我觉得这应该是用羟乙基初步去除红细胞，在用FIOCOLL分离，提高FIOCOLL的工作效率。但是多一次分离，细胞就会多一点损失，当然这只是我的估计啊，实际还是以实验为主。不过单核细胞肯定没有有核细胞数量多的。有核细胞包括单核细胞吧，我是这么认为的，也不确定对不对。
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jiuxuya
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2018-4-9 15:12
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fenglinzhu
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' E" R# ?! B- a- Y
! ?- e, q6 e! G' [5 \) i' g) D
明白，您说羟乙基初步去除红细胞，您之前说然后再用红细胞裂解液这个是主要去除红细胞的吧，效果好吗？按照您的做法，一般您的细胞回收率达到多少呢？
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fenglinzhu
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2018-4-9 15:57
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jiuxuya
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, P/ ]# m1 }9 I! B# Y5 L
+ `: f; \0 p; m% c5 C8 o' ^- M7 ]: @
可以多次羟乙基处理，但我没试过，觉得太费时间，所以我用羟乙基一次处理后离心，然后收集沉淀用红细胞裂解液裂解后，总体来说平均能收到2*108个有核细胞吧，回收率没算过，近期准备跑一下流式看看CD34+含量，到时候看看含量到底有多少。用FIOCOLL分离大概能分离到1-2*107个细胞。
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红细胞裂解液裂解效果还是挺好的，但是还是会影响活率，但是我觉得这样会省时省料。
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2018-4-10 10:17
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jiuxuya
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* ~: P& V# @/ `9 ? x
$ N7 E4 l! ~$ y
用外周血分离造血干细胞才需要用药物动员，免疫细胞的话，不用动员
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jiuxuya
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2018-4-10 11:38
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" M) D' N/ @* e2 H: r
* W9 B1 z! S* y; b5 y3 L
明白了，就是外周血中造血干细胞太低了，所以需要动员来刺激，免疫细胞因为是要的CIK,或者NK，所以不需要。
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jiuxuya
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2018-4-10 11:41
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fenglinzhu
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+ K4 l8 M/ J! Z: ?8 D
6 l0 ~; O* m: i& X2 O
明白，您用的羟乙基淀粉和细胞裂解这套方法，是否也是包含了自然沉降法呢？是不是您用羟乙基后自然沉降个半个小时左右，然后离心，然后再像您所讲的用红细胞沉淀用红细胞裂解？裂解之后也会有白膜层吗？
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jiuxuya
时间:
2018-4-10 11:45
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fenglinzhu
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; O: H/ F9 E/ d* `) o
4 O1 X8 s1 r6 `% l2 ~) _! t5 N4 t
您这里所说的CD34+造血干细胞一般占据有核细胞总数的百分30吗？这个是通常占有率吗？
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fenglinzhu
时间:
2018-4-10 12:37
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jiuxuya
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( ~$ U1 H$ r$ i5 u. m2 q
" a) N+ {, c+ o2 T0 e
骨髓移植所需要的CD34+（造血干）细胞量为2*106/kg，这是治疗标准。而脐血一般情况下只能满足10岁以下，体重不超过30kg的患者使用，按30kg算的话，也就是说一般情况下CD34+细胞大概有6*107个（这个数据是我根据治疗标准推算出来的），而我收到的细胞总数平均是2*108个，也就是理论上CD34+细胞应该占我收集到的有核细胞数的30%左右，实际的话要等跑了流式才能知道，近期我会做一些流式数据出来。
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fenglinzhu
时间:
2018-4-10 12:47
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jiuxuya
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) l" u S8 T, \3 B3 }
/ Q& _! q( ~. v( N3 R- B& \
其实你细心观察的话沉降完离心结束后能够看到红细胞上面有一层薄薄的白色细胞层，那一层就是有核细胞。我就吸去那一层，尽量不吸去下面的红细胞，然后再用红细胞裂解液裂解，裂解完离心沉淀就是白色的细胞。
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随时准备下线
时间:
2018-4-10 19:23
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jiuxuya
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8 p$ @) w) n, ^" u, V( K9 l
4 K; u# O! i: z
正解
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jiuxuya
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2018-4-11 14:06
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fenglinzhu
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$ C% Q4 `; `+ ]3 K8 W2 Q
0 b- U* f9 X: L
是这样的，我看了一篇2011年的文献，上面写移至标准是2*10的7次方/KG，他们分离出的有核细胞总数为1.52+-0.89*10的9次方，血液量应该为100ml，您这边总数是2*10的8次方，差距是不是有些大了文献里的数据？
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jiuxuya
时间:
2018-4-11 14:07
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fenglinzhu
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$ z5 v' W+ w9 S; ]3 Q, C# [
0 w' N) V0 T1 U H$ P7 Y0 V
您去吸那一层您是用分浆夹压到另一个转移袋这种方法吸的吗？一般来讲这样应该总会留有剩余。
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jiuxuya
时间:
2018-4-11 14:16
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fenglinzhu
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* C) J. N: c; A
/ L# }' X# ~2 E2 X
您分离的时候也是两个袋子连着做的吧？那您分离的时候是将血袋连着止血钳一起放在离心机去离心吗？
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fenglinzhu
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2018-4-12 08:57
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jiuxuya
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/ M N) w8 q0 g
) s0 |9 \, }: X4 m% U
http://www.docin.com/p-1852582053.html
9 z- i. y5 ]# C, L
链接是2017版的造血干移植规范
& n3 [% {2 h, S1 n
我记错了，脐血移植的话CD34+细胞要求为2*105/kg，
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外周血移植CD34+细胞为2*106/kg
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所以我之前算出来的占有率应该也是错的。
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jiuxuya
时间:
2018-4-12 10:51
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fenglinzhu
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! d4 T6 z- ?/ U
3 X2 E. b- ] @
好吧，您觉得二次分浆法怎么样？对比先HES再FICOLL这种方法效果哪个好呢？
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fenglinzhu
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2018-4-12 16:55
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jiuxuya
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) Q6 s' c% u( C5 b8 H
4 z- l( r, q2 Z" I# w: n& L$ z1 s
我觉得这个没法比较吧，得到的东西不一样，HES不管你分几次，你得到的都是有核细胞，用了FICOLL得到的是单核细胞，HES再FICOLL可以减少FICOLL的使用量和FICOLL的工作效率，但是FICOLL分离得到的单核细胞肯定比有核细胞来的少，差了一个数量级，数据上会显的少一点。其次，因为造血干本身含量非常少，在造血干细胞总数一定的情况下，当然是其他细胞多一点，冻存的时候造血干的死亡率会稍微低一点，但如果细胞数量太多的话，又会耗费太多空间和试剂去冻存，所以我选择HES+红细胞裂解这个方案。
作者:
jiuxuya
时间:
2018-4-13 13:16
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fenglinzhu
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1 |. l7 X8 K, a2 ?
+ B9 I: L$ `( L) n! D1 |
谢谢回答，那是不是就是说如果要分离想养免疫细胞的话，最好分离液还是用HES比较好，因为您刚才说HES分离的有核细胞中的单个核细胞数量多余FICOLL的，但我想有一个问题，就是有核细胞应该比较杂吧？是否用有核细胞诱导免疫细胞的话杂细胞会比较多呢？
作者:
fenglinzhu
时间:
2018-4-16 09:03
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jiuxuya
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6 K; h2 s3 k2 \2 R- B& k; e
- F7 Z2 z+ N2 e
做免疫细胞诱导用FICOLL啊
作者:
jiuxuya
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2018-4-16 10:32
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fenglinzhu
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3 k' }' X, C( P1 Y+ H- r s
2 [6 g: C. ~' S5 r
是这样的，我这里是做储存单个核细胞的，如果我想尽可能的分离得到更多的单个核细胞，那么我的分离方案是否为先HES，再用FICOLL这样效果比单次FICOLL分离出的单个核细胞数量要好呢？
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