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标题:
脐带msc培养操作规程
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作者:
wuxiao101325
时间:
2010-3-10 14:48
标题:
脐带msc培养操作规程
本帖最后由 细胞海洋 于 2012-10-18 10:12 编辑
' p4 U& O! o. `" I4 V0 t, e; `
4 r- Y1 ~+ T, @7 P0 t
请指教
作者:
beidouhan
时间:
2010-6-28 10:21
呵呵，我们也是这个操作，谢谢了
作者:
deron
时间:
2010-7-5 18:53
好文！
' M6 r+ a8 y4 K! T# x6 a/ a( X2 A+ h
不敢说指教，提一点意见：
- f; n' J9 ^5 m: a0 t# u, O- d
1.脐带没有剔血管，培养出来的细胞是否会有血管内皮细胞污染
9 z! _3 p- u% W) J4 n( t" Q
2.10的8次方每毫升，这个冻存浓度是否过高呢？个人认为可以降到1/4~1/3
" G ?5 w0 _1 M5 y
3.消化过程可以考虑用摇床，方便高效
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-7-6 09:51
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18#
deron
. n9 ?; B& [6 t6 g
1、关于血管内皮细胞的污染问题：我们做过CD34的流式检测，结果为阴性，至于KDR和CD133，我们没有买抗体，没做过，不过有CD34的结果，应该可以排除污染问题吧；
7 O; Z8 K! J* x" [ t
2、确实如你所说，我们在后来的实验中发现，10的8次方确实太多，10的5~6次方比较理想；
' ]: \5 ?. R0 t& L
3、我们后来也考虑到消化效果的问题，也采用了37°恒温摇床，确实效果很不错，如果标本来得晚，还试过只用胶原酶消化过夜，效果更好。
' b/ O0 {4 P# B) O; R7 x
共同学习讨论！
作者:
lchanlon
时间:
2010-8-17 11:49
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4#
wuxiao101325
" _% v8 n2 W+ c3 I v" E4 {
/ c$ w% Z9 n0 h& D2 d3 [
" x$ g. A6 c6 k$ x
我想问一下，用胶原酶IIII来消化行吗？？
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-8-19 09:03
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5#
lchanlon
5 J! J; L7 W U% `& \1 U; d: e
这个我们没试过，你可以对照二型胶原酶试试看
作者:
鹭岛之滨
时间:
2010-8-19 09:22
收藏，学习一下，
作者:
lanyew
时间:
2010-8-26 13:06
谢谢啦！
作者:
宥宥自得
时间:
2010-9-2 15:16
请问一下这篇文献是哪本书中的一个章节吗？要是的话是那本书呢？想看看其中有没有关于胎盘MSC培养的内容。谢谢分享一下！
作者:
missyoudad
时间:
2010-10-22 13:44
谢谢
作者:
xiaodiao123
时间:
2010-11-17 08:40
xiexie,看看了
作者:
柏林小杨
时间:
2010-11-17 15:06
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3#
deron
( z$ i, B& b9 k& w2 Z/ G2 m
! W Z5 T( n5 t
; L: }# J0 u* O. g8 \& W
摇床的速度控制在多少为宜呢？谢谢
作者:
柏林小杨
时间:
2010-11-17 15:19
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1#
wuxiao101325
) u. K9 t8 W5 ]
* R; G) i2 `8 |; H+ Y3 ?6 Z
c. h. f1 l: n8 U- f- a9 \
请问你们消化完的细胞悬液不粘稠吗？
作者:
deron
时间:
2010-11-17 15:53
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12#
柏林小杨
( ^! o4 Z+ F8 `. U& Z7 e
7 G5 y2 R3 g0 N7 ?7 F9 i
1 W: R; a" R* J$ [/ ]. S
无所谓快慢，就是一个让酶和组织充分混匀的步骤。
作者:
柏林小杨
时间:
2010-11-18 08:59
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14#
deron
+ s g; a! M( m. C5 ^: R/ T
9 L+ [; H8 u! w
6 \" w' E" a( _! z
好的 谢谢
作者:
哇牛
时间:
2010-11-19 15:05
学习一下
作者:
xiaoming210
时间:
2010-11-24 21:33
学习了
作者:
sydfxt
时间:
2010-12-15 23:13
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wuxiao101325
的帖子
# O& B( Q- r# Y b! X
9 J" _" a; g/ F1 u( J* k$ E, Y
请问100U的2型胶原酶是相当于多少毫克啊?谢谢
作者:
sydfxt
时间:
2010-12-15 23:20
发现一个问题,你说直接吸取上清放培养瓶培养,再加入培养基,那4ml上清里含有的那些胶原酶不妨碍细胞生长?再就是这样养的话以我的经验,细胞液岂不是会非常非常粘稠?
作者:
sydfxt
时间:
2010-12-15 23:28
请楼主尽快回复,不胜感激
作者:
西瓜太郎
时间:
2010-12-17 08:36
上清液6倍PBS稀释，1000转 5分钟离心
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-12-17 08:43
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sydfxt
的帖子
$ }* T2 w, }4 ^, m
% F# ]! c$ I m% D W
不好意思，昨天断网没能及时回复
' x" a; ]* ]) [6 p, x
按我们的经验那些胶原酶不会影响细胞生长，细胞液确实如你所说很粘稠，但是没关系，就算换液后，细胞自己也会分泌一些东西使培养液粘稠的，可能这是脐带间充质细胞的特性吧，要不脐带中的粘稠的华通氏胶又是哪来的呢？
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-12-17 08:44
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sydfxt
的帖子
" M# B$ E: U. o
) q4 C) a. ~% H$ C) a2 m
这要看你买的胶原酶上的包装说明了
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-12-17 08:48
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柏林小杨
的帖子
8 z+ ]3 |" Q& n8 a5 d% p. h/ _
6 `6 G$ i9 l& C* \# K4 K
对不起，前段时间出差没看到你的问题，希望本贴对你有所帮助
8 G: b) k: |$ ?& v8 k
消化液确实非常粘稠，不过没关系，直接接到培养瓶里就行，不会影响的
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-12-17 08:49
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西瓜太郎
的帖子
7 J$ e$ m% {+ J# {) C( E8 x0 V
4 F8 {( C, c8 x/ _6 X6 }; z
我们做过稀释实验，但是效果比不上直接接种的
作者:
impingfan
时间:
2010-12-17 09:45
谢谢分享~~~
作者:
sydfxt
时间:
2010-12-21 19:18
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wuxiao101325
的帖子
1 ^3 b. @3 F/ S4 W' r
: Y* S7 ~* z0 |. m- X
谢了,那我明天就试试
作者:
tkpss18
时间:
2011-1-14 09:35
thz for sharing~
作者:
tangyvhuang
时间:
2011-1-17 00:03
得到的细胞杂不杂啊？上皮细胞，血管内皮细胞等等吧，第一代就会很纯吗？
i |$ N3 ]' j" ^) Q& s# F, J
胰酶夹在里面会不会伤到细胞啊一个小时？
7 t5 W- M/ H' o
消化传代时候10分钟是不是有点长了啊，我这里基本上一分钟就开始脱落了
作者:
kingchen81
时间:
2011-1-27 23:46
建议还是要将脐带外层包膜剥离，去除两根动脉和一个静脉。只留下wharton's jelly,这样分离出来的细胞才可能比较纯的说是间充质细胞。要不然不一定是什么细胞。。。。
作者:
tkpss18
时间:
2011-1-28 09:01
你好，我想问你们用的DMEM和FBS是在那个厂家买的？谢谢你
作者:
柏林小杨
时间:
2011-1-28 09:30
看你的操作，并没有对消化之后收集的细胞计数啊，请问你们一厘米的脐带，消化后原代细胞的收率能到多少？
作者:
西瓜太郎
时间:
2011-2-12 08:23
楼主你好 我用你的方法 很粘稠 上镜看没有细胞啊 可以加我QQ么 ？304775919 请赐教·
作者:
柏林小杨
时间:
2011-2-15 09:20
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wuxiao101325
的帖子
1 i' W: T+ C0 H5 n
5 Y5 }% \; l& @& _+ ^ ?$ y6 m
好的 我对比一下试试吧！
作者:
haoxinaok
时间:
2011-2-18 14:10
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kingchen81
的帖子
, O7 l1 ?5 a8 |0 r2 c
9 {: O9 M7 z/ l% z0 G
非常同意楼上的观点。我想请教的是：如果脐带的外层包膜及动脉和静脉去除不干净的话，除了可能会造成细胞纯度不高（？）外，还会影响脐带间充质干细胞的贴壁吗？为什么？请高手指点！多谢！
作者:
kingchen81
时间:
2011-2-26 15:17
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haoxinaok
的帖子
0 b' u0 }: S7 ^- S& M; m" g4 w
* _: T4 q. V$ g& B; R. C& F6 R1 R
不会影响的。但是细胞纯度不高的话比较麻烦。
作者:
luckzhuo1982
时间:
2011-10-26 15:24
xiexie
& x' x- _( O: ^- E
作者:
1301918986
时间:
2011-10-27 09:55
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wuxiao101325
的帖子
7 c) d$ z7 d+ S/ t8 w
a. v: T+ {1 t$ x9 A$ X
呵呵，谢谢
0 ^7 S' k" F4 H
作者:
紫电苍炎
时间:
2011-10-29 19:58
为什么下载不下来哦....
作者:
menghy
时间:
2011-10-30 19:49
谢谢分享！！
作者:
barley
时间:
2011-10-30 21:42
需要过夜么？感觉一般用复合胶原酶一小时之内就可以了 37度恒温摇床
作者:
barley
时间:
2011-10-30 21:45
感觉动脉血管是要去掉的，静脉不用，消化用胰酶伤害比较大，胶原酶就可以。粘和脐带的性质有关，不过少量的DNA酶似乎有帮助。
作者:
alidelong
时间:
2012-10-18 09:50
谢谢分享
作者:
Demon_CN
时间:
2012-10-25 14:38
这个写的太粗糙了，
! I: V" z2 F0 [/ Z
纯度应该不高。静脉和动脉都没有去除。
" [% Y' f+ }% _; S
文章不够精华！
作者:
fm001982
时间:
2012-10-26 10:07
学习一下，总有可取之处。
作者:
slqing168
时间:
2012-11-1 15:39
楼主辛苦了
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楼主辛苦了