干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
脐带msc培养操作规程
[打印本页]
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-3-10 14:48
标题:
脐带msc培养操作规程
本帖最后由 细胞海洋 于 2012-10-18 10:12 编辑
& A8 A! ~. ~9 a7 ^! T4 V, A+ n
& P+ b) F, S& X. Z" R$ r: Z
请指教
作者:
beidouhan
时间:
2010-6-28 10:21
呵呵，我们也是这个操作，谢谢了
作者:
deron
时间:
2010-7-5 18:53
好文！
: m0 r, a" G5 y; a0 Q+ D
不敢说指教，提一点意见：
3 U% \' ~- o; w) S, r }
1.脐带没有剔血管，培养出来的细胞是否会有血管内皮细胞污染
* ?. g7 ]" K: t& F3 X
2.10的8次方每毫升，这个冻存浓度是否过高呢？个人认为可以降到1/4~1/3
# i4 k3 U- d a) x/ ~
3.消化过程可以考虑用摇床，方便高效
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-7-6 09:51
回复
18#
deron
* R" S$ [- O' O+ O# w ]' x* H
1、关于血管内皮细胞的污染问题：我们做过CD34的流式检测，结果为阴性，至于KDR和CD133，我们没有买抗体，没做过，不过有CD34的结果，应该可以排除污染问题吧；
% `* ^, v+ ^: {+ `! ?. H
2、确实如你所说，我们在后来的实验中发现，10的8次方确实太多，10的5~6次方比较理想；
3 h9 O1 ~4 R; G5 Z
3、我们后来也考虑到消化效果的问题，也采用了37°恒温摇床，确实效果很不错，如果标本来得晚，还试过只用胶原酶消化过夜，效果更好。
( }* s' p" l& q- t* `2 U1 z6 I
共同学习讨论！
作者:
lchanlon
时间:
2010-8-17 11:49
回复
4#
wuxiao101325
& e* S5 q+ X& N! T! g
0 ~/ ^' X; ? \) n2 Z
6 l; u$ @( n$ K# u
我想问一下，用胶原酶IIII来消化行吗？？
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-8-19 09:03
回复
5#
lchanlon
2 i# \4 t J4 B1 N4 X' i
这个我们没试过，你可以对照二型胶原酶试试看
作者:
鹭岛之滨
时间:
2010-8-19 09:22
收藏，学习一下，
作者:
lanyew
时间:
2010-8-26 13:06
谢谢啦！
作者:
宥宥自得
时间:
2010-9-2 15:16
请问一下这篇文献是哪本书中的一个章节吗？要是的话是那本书呢？想看看其中有没有关于胎盘MSC培养的内容。谢谢分享一下！
作者:
missyoudad
时间:
2010-10-22 13:44
谢谢
作者:
xiaodiao123
时间:
2010-11-17 08:40
xiexie,看看了
作者:
柏林小杨
时间:
2010-11-17 15:06
回复
3#
deron
1 A6 V6 `5 e! M7 |& N; _2 n
# [+ e0 w: K9 Q* }) [; ]
- a2 r& }" P$ T" |2 t% y
摇床的速度控制在多少为宜呢？谢谢
作者:
柏林小杨
时间:
2010-11-17 15:19
回复
1#
wuxiao101325
) Z( I! v: O$ e2 M4 T
# l. h! d0 \( ~' l Q; Y' {" F' S
! q* z2 M& {& g- [' S. a
请问你们消化完的细胞悬液不粘稠吗？
作者:
deron
时间:
2010-11-17 15:53
回复
12#
柏林小杨
1 \' w' f# @! k: ], i
& b, v$ c, u; R! [' u
, o& D( F$ U, w, f& Z8 K% M
无所谓快慢，就是一个让酶和组织充分混匀的步骤。
作者:
柏林小杨
时间:
2010-11-18 08:59
回复
14#
deron
2 Y3 }5 U7 e: y' ?& T$ R! p+ P
5 E% e6 K" N) g" [' H9 i0 {
?: Q4 h2 j3 M; C' q
好的 谢谢
作者:
哇牛
时间:
2010-11-19 15:05
学习一下
作者:
xiaoming210
时间:
2010-11-24 21:33
学习了
作者:
sydfxt
时间:
2010-12-15 23:13
回复
wuxiao101325
的帖子
# z r! W) N6 f* j& N
2 c, x0 g3 B4 E3 d4 c' h* g
请问100U的2型胶原酶是相当于多少毫克啊?谢谢
作者:
sydfxt
时间:
2010-12-15 23:20
发现一个问题,你说直接吸取上清放培养瓶培养,再加入培养基,那4ml上清里含有的那些胶原酶不妨碍细胞生长?再就是这样养的话以我的经验,细胞液岂不是会非常非常粘稠?
作者:
sydfxt
时间:
2010-12-15 23:28
请楼主尽快回复,不胜感激
作者:
西瓜太郎
时间:
2010-12-17 08:36
上清液6倍PBS稀释，1000转 5分钟离心
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-12-17 08:43
回复
sydfxt
的帖子
% }, \8 v/ d; Z) K1 X! H, i0 b' u
; }. A# X% c! ?
不好意思，昨天断网没能及时回复
: N# {, }/ d# ~( A' m
按我们的经验那些胶原酶不会影响细胞生长，细胞液确实如你所说很粘稠，但是没关系，就算换液后，细胞自己也会分泌一些东西使培养液粘稠的，可能这是脐带间充质细胞的特性吧，要不脐带中的粘稠的华通氏胶又是哪来的呢？
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-12-17 08:44
回复
sydfxt
的帖子
" [* i& y+ e1 ]% D+ X
' o3 }, ^7 C P: }
这要看你买的胶原酶上的包装说明了
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-12-17 08:48
回复
柏林小杨
的帖子
0 Q) I J2 V1 U7 v# s3 M
& P, m6 z, Z, H' F
对不起，前段时间出差没看到你的问题，希望本贴对你有所帮助
( D3 O% C$ v& s* k/ f& o
消化液确实非常粘稠，不过没关系，直接接到培养瓶里就行，不会影响的
作者:
wuxiao101325
时间:
2010-12-17 08:49
回复
西瓜太郎
的帖子
' A L5 M# P; l% A. X
) k: J; v# a7 {/ D# e. G. ~
我们做过稀释实验，但是效果比不上直接接种的
作者:
impingfan
时间:
2010-12-17 09:45
谢谢分享~~~
作者:
sydfxt
时间:
2010-12-21 19:18
回复
wuxiao101325
的帖子
7 B/ e; B+ s+ o% J2 C, O
3 @( m$ D9 X3 v! ` i/ U- b
谢了,那我明天就试试
作者:
tkpss18
时间:
2011-1-14 09:35
thz for sharing~
作者:
tangyvhuang
时间:
2011-1-17 00:03
得到的细胞杂不杂啊？上皮细胞，血管内皮细胞等等吧，第一代就会很纯吗？
# C2 p x: ?' }
胰酶夹在里面会不会伤到细胞啊一个小时？
: M8 u8 T. r5 Y; _1 t- E
消化传代时候10分钟是不是有点长了啊，我这里基本上一分钟就开始脱落了
作者:
kingchen81
时间:
2011-1-27 23:46
建议还是要将脐带外层包膜剥离，去除两根动脉和一个静脉。只留下wharton's jelly,这样分离出来的细胞才可能比较纯的说是间充质细胞。要不然不一定是什么细胞。。。。
作者:
tkpss18
时间:
2011-1-28 09:01
你好，我想问你们用的DMEM和FBS是在那个厂家买的？谢谢你
作者:
柏林小杨
时间:
2011-1-28 09:30
看你的操作，并没有对消化之后收集的细胞计数啊，请问你们一厘米的脐带，消化后原代细胞的收率能到多少？
作者:
西瓜太郎
时间:
2011-2-12 08:23
楼主你好 我用你的方法 很粘稠 上镜看没有细胞啊 可以加我QQ么 ？304775919 请赐教·
作者:
柏林小杨
时间:
2011-2-15 09:20
回复
wuxiao101325
的帖子
8 d/ ]6 s8 k* [* Q
3 C, g+ M1 Z6 O/ ^/ k
好的 我对比一下试试吧！
作者:
haoxinaok
时间:
2011-2-18 14:10
回复
kingchen81
的帖子
: m% s# P* c+ g9 c; ~
6 e# U( B5 t. p6 q
非常同意楼上的观点。我想请教的是：如果脐带的外层包膜及动脉和静脉去除不干净的话，除了可能会造成细胞纯度不高（？）外，还会影响脐带间充质干细胞的贴壁吗？为什么？请高手指点！多谢！
作者:
kingchen81
时间:
2011-2-26 15:17
回复
haoxinaok
的帖子
0 s2 i& F, \! P! q
( W' t) p0 e6 W
不会影响的。但是细胞纯度不高的话比较麻烦。
作者:
luckzhuo1982
时间:
2011-10-26 15:24
xiexie
( g% ?% ?4 @5 m9 q) }
作者:
1301918986
时间:
2011-10-27 09:55
回复
wuxiao101325
的帖子
9 J; d' o- E0 m3 k* }3 S0 s
8 q0 b3 J0 |! z. C! U* i
呵呵，谢谢
. r6 T7 c: x9 l4 Q
作者:
紫电苍炎
时间:
2011-10-29 19:58
为什么下载不下来哦....
作者:
menghy
时间:
2011-10-30 19:49
谢谢分享！！
作者:
barley
时间:
2011-10-30 21:42
需要过夜么？感觉一般用复合胶原酶一小时之内就可以了 37度恒温摇床
作者:
barley
时间:
2011-10-30 21:45
感觉动脉血管是要去掉的，静脉不用，消化用胰酶伤害比较大，胶原酶就可以。粘和脐带的性质有关，不过少量的DNA酶似乎有帮助。
作者:
alidelong
时间:
2012-10-18 09:50
谢谢分享
作者:
Demon_CN
时间:
2012-10-25 14:38
这个写的太粗糙了，
8 R t; U% O' X
纯度应该不高。静脉和动脉都没有去除。
, _; K) [7 T3 h
文章不够精华！
作者:
fm001982
时间:
2012-10-26 10:07
学习一下，总有可取之处。
作者:
slqing168
时间:
2012-11-1 15:39
楼主辛苦了
欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)
Powered by Discuz! X1.5
楼主辛苦了