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标题: 我一直做胚胎干细胞转染方面的实验，但转染效率很低，请教大侠们的高招！ [打印本页]

作者: blue11sea 时间: 2010-3-26 08:58 标题: 我一直做胚胎干细胞转染方面的实验，但转染效率很低，请教大侠们的高招！

本帖最后由细胞海洋于 2010-3-26 09:46 编辑

我一直做胚胎干细胞转染方面的实验，但转染效率很低，请教大侠们的高招！

作者: ppcl2 时间: 2010-4-4 11:49

用电转，加puromycin筛。

作者: nhzxcsc 时间: 2010-4-4 12:55

现在文献报道的转染效果好像都不是特别好吧，可以多种方法都去试试

作者: cony 时间: 2010-4-12 10:07

回复 2# ppcl2 ! v s& a% c: d' |$ c* ~

你们用电转效率大概是多少？

作者: ruofan1982 时间: 2010-6-7 16:47

我也是用的电转，一96孔板一般都能筛到几个阳性克隆， c5 b9 G9 N' s0 Q7 p
不过有的载体确实不好做，可能和载体本身有关

作者: farmer 时间: 2010-6-8 17:30

回复 5# ruofan1982 ) O8 n$ c% C# r# X7 Q M# a
/ B( B" A* S- d0 M8 e9 o
" x' o z8 w9 E9 o% K4 a7 W
学习一下。

作者: gh2010 时间: 2011-9-15 23:42

我现在在试电转，乳腺干细胞转染绿色荧光，24小时一个孔就2个有荧光，但36h时有7-8个，可能电转以后的48h应该是细胞的恢复期，我打算48h以后加puromycin, 希望能多点阳性克隆~~~

作者: yangqiurui 时间: 2011-9-16 10:22

人胚胎干细胞转染效率低于鼠胚胎干细胞，也不知你说得是哪个物种的胚胎干细胞。

作者: echowdk 时间: 2011-9-16 10:43

回复 gh2010 的帖子+ t! q ~0 g& X/ k4 n' f& |

用什么试剂啊，lipo吗？试试悬浮转染的方法。

作者: gh2010 时间: 2011-9-17 02:25

回复 echowdk 的帖子
/ N4 ]+ T l2 C, y
电转，invitrogen的电转仪和试剂:suspension buffer和电解液,就是现在电转参数还没有优化，我的细胞是悬浮的，而且sorting以后得到的干细胞不多，努力优化中。。。。

作者: echowdk 时间: 2011-9-17 11:26

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( V5 f6 m& J. F
哦，我用的是BIO-RAD的电转仪，参数什么的基本已经系统化了，所以做的还可以。

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