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标题: 跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？ [打印本页]

作者: guojingjing 时间: 2010-3-31 08:37 标题: 跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？

跟大家讨论一个问题啊，胰酶消化对神经干细胞有没有影响呢？我最早开始做NSCs的时候是老板交的，说不能用胰酶消化，NSCs比较脆弱，所以我一直都是机械吹打，每次做实验胳膊都疼的不行，后来受不了拿0.025%的胰酶消化1min就觉得好吹多了。但是不确定对其性质有没有什么改变

作者: lpzhdm 时间: 2010-3-31 15:00

能不能赠送神经干细胞，或者交换

作者: ziyunfei1982 时间: 2010-3-31 15:40

c57 小鼠神经干细胞求交换，你有什么？

作者: jennyshy 时间: 2010-3-31 16:41

胰酶消化时间过长或者浓度过大会对NSC细胞表面的受体造成损伤，如果要用胰酶消化最好浓度要低，一般用0.5%Trpsin，时间也要短，我一般用用胰酶消化3min左右再吹打。

作者: have-a-rest 时间: 2010-4-1 01:12

本帖最后由 have-a-rest 于 2010-4-1 01:14 编辑

胰酶消化时间过长或者浓度过大会对NSC细胞表面的受体造成损伤，如果要用胰酶消化最好浓度要低，一般用0.5%T ... u/ n/ L1 A1 r' S, v% x0 F
jennyshy 发表于 2010-3-31 16:41

0.5%似乎很高浓度哦。应该0.05%，时间可以长一点。消化应该会影响NSC的分化潜能，不妨尝试机械传代。

作者: iseeyou1210 时间: 2010-4-5 21:05

we used the trypsin from the invitrogen.
But they provide the red and white trypsin with the same concentration.
normally we use the write one for the ES and NSC culture.3 V3 k+ I& A& [3 R- C% l* w& M2 m
some people know the difference between these two things？

作者: guojingjing 时间: 2010-4-6 08:35

回复 6# iseeyou1210
* t0 j, D1 g3 v+ g( R

这两种胰酶颜色上的差异是因为酸碱指示剂的有无。红色的为加酚红的，无色的没有加，我们一般自己配的胰酶都不加酚红。用这种加了酚红的可以监控PH，但是某些细胞培养不能有酚红

作者: iseeyou1210 时间: 2010-4-6 22:12

还有一个问题，大家说的机械吹打，是用枪头还是用needle，那种反复吸打？+ u& _9 |8 h6 Y
谢谢！
因为最近要做这个，干脆来个详细的，最好哪位能给一个详细的protocol。
tangliang.li@gmail.com

作者: apengforever 时间: 2010-4-7 09:42

看来大家手里都挺有货的，呵呵，以后需要各位多多帮助，关于胰酶消化后对神经干的影响，我个人感觉应该会有的，因为每次消化后贴壁分化的细胞会增加，且再成球较难，可以结合消化法和机械吹打法，可以尝试更低的胰酶浓度，如0.01，时间稍长一些。

作者: guojingjing 时间: 2010-4-7 13:40

回复 9# apengforever & F7 b! s; L# o& ]4 ^+ K4 M) d
2 i/ c% J6 U3 Q4 k$ h$ d
: o2 M. r8 e5 A1 |3 c0 A
呵呵，同意楼上观点

作者: jennyshy 时间: 2010-4-20 19:46

是0.05%，打错了2 P& L( x0 t- U. F+ @* Q$ j

低浓度的好

作者: dulaiyouyu 时间: 2010-4-22 15:02

胰酶效果好像确实差一些。) R0 u+ y* I! [ e, o+ f. T9 S* b
1 A8 O: v* ^4 _
我们实验室是用比较温和的木瓜蛋白酶。

作者: luckydog 时间: 2010-11-25 12:38

为什么细胞传代后生长缓慢，是不是跟胰酶消化有关。我们是用0.025%的胰酶+机械吹打。

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