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标题: 如何从脐带提取间充干？脐带应该用什么容器运输？ [打印本页]

作者: tefuir 时间: 2018-7-22 12:10 标题: 如何从脐带提取间充干？脐带应该用什么容器运输？

运输脐带所用的容器是什么？如何提取间充干

作者: lina1309211983 时间: 2018-7-23 10:31

运输脐带用灭菌的医用广口瓶就行。提前间充质干细胞有两种，一种是酶消化法（胶原酶，透明质酸酶，中性蛋白酶），一种是组织贴壁法。

作者: uslzhang 时间: 2018-7-23 11:19

夏天运输最好温度不要过高，提取方法文献上有详细描述* W9 w3 z& U E0 b

作者: caoyue 时间: 2018-7-24 11:04

运输有温度控制的，最好在4℃，无菌脐带采集瓶就可以。提取的话，两种方法，酶消化，组织贴壁。

作者: 水蒸气 时间: 2018-7-25 11:10

回复 lina1309211983 的帖子

你好，可以问一下你的消化法怎么做的吗

作者: tefuir 时间: 2018-8-1 11:17

回复水蒸气的帖子( w9 {6 O# ~: g9 `5 X( @& ~

在生物安全柜中取出脐带，用75%的酒精进行清洗两次，动作要迅速，然后用PBS进行清洗，直到把血水洗净。: [% i5 c' f4 A4 ~: `/ M+ t
将脐带剪成2-3cm的小段，然后纵向剖开，剔除1条脐静脉，2条脐动脉，用无血清培养基洗两次，将组织块浸泡在0.1%的胶原酶中，37℃消化4-6h。; |6 b% a% J* R
加入生理盐水（消化液体积的2倍），2000r/min，5min离心。
弃上清，加入2.5%的胰酶，37℃处理30min，加入生理盐水（消化液体积的2倍），100目筛网过滤，滤液经2000r/min，5min离心，弃上清。重复两次。. u& t o/ I' W+ B& U" O
弃上清后加培养液重悬细胞，进行细胞计数，调整细胞浓度用于培养。# j1 N, z- L9 J6 O- x+ ?
每天用倒置荧光显微镜观察细胞的生长情况。
待细胞长至80%-90%时，更换培养液，用胰蛋白酶进行消化。待细胞消化下来时，加PBS终止消化，加培养液按照1:3或1:4进行传代培养。

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