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标题: 今天养MEF过程中发现的问题，请教大家 [打印本页]

作者: cony 时间: 2010-5-1 17:45 标题: 今天养MEF过程中发现的问题，请教大家

今天我要复苏ES细胞，对MEF进行丝裂酶的处理。处理前六孔板上MEF还是铺得80-90%汇合的，但是三个小时的丝裂酶处理后，发现MEF饲养层变了，如何变请看图，图一为处理前，图二为处理后，红色区域为无MEF区域。。。[attach]7143[/attach]$ \. l, J# B4 m4 ~. @3 X
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作者: ellapan 时间: 2010-5-1 19:33

你这是怎么拍的图片呀红色的来个特下吧

作者: 开心果王 时间: 2010-5-1 22:21

楼主，贴张真实的图吧。您这有点抽象啊！
丝裂霉素的量是多少啊？会不会太高了。

作者: ambassador 时间: 2010-5-1 23:13

红色区域可能是凋亡的细胞？

作者: mominglily 时间: 2010-5-3 15:12

哇，太卡通了吧？到底怎么个改变啊？！

作者: jiejesse 时间: 2010-5-5 13:45

我倒感觉到是你自己用枪头或移液管吧那些地方的细胞给刮掉了，不然不会出现这种情况的

作者: cony 时间: 2010-5-5 17:31

向大家汇报，用的是10ul/ml丝酶，而且绝对不是换液时吹走了。暂时没有光盘复制下来，不好意思

作者: cony 时间: 2010-5-5 17:34

还有，今天又碰到了一种情况，我用的是六孔板养的，发现MEF从孔边缘往回缩，有的缩成一个乳白色不明物体，应该是MEF组成的，本来是长得很密的，结果缩了以后就基本上变没了，郁闷。。。也是第一次碰到这种情况。大家有没法啊？就算MEF长得好，我复苏的干细胞也长不起来，太背啦，大家指导一下啊。。

作者: 上海过客 时间: 2010-5-6 10:33

还有，今天又碰到了一种情况，我用的是六孔板养的，发现MEF从孔边缘往回缩，有的缩成一个乳白色不明物体，应 ... ?$ U2 F# T/ _) c. v4 B& C2 [
cony 发表于 2010-5-5 17:34

2 n' X! X$ r h& Y& p
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我好像也遇到过这样的问题。不过很怪的是，6孔板中只有一个到两个孔是这样。
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怀疑是 6孔板的质量问题。

作者: zsc78 时间: 2010-5-7 21:24

个人觉得可能是MEF的状态不好，细胞密度比较高，被枪头刮到的地方容易脱落。不一定对哈。

作者: cony 时间: 2010-5-10 17:04

奇怪，过了一天，它又长汇合了。。郁闷。

作者: afei198520 时间: 2010-5-28 11:14

回复 11# cony

呵呵 MEF长的很快的 * H: P) Q7 g- V$ C5 g- h
是不是加液的时候蹭掉的呢？

作者: 是鸟就要去飞 时间: 2010-9-2 11:20

看来上面有的人好像没明白楼主的意思，楼主上个实图大家就明白了，也好分析

作者: fespysok 时间: 2010-9-8 15:21

我觉得MEF状态不好，部分细胞发生凋亡，粘附力下降了

作者: supergama 时间: 2010-9-9 13:02

从示意图看，细胞状态不会太好所以丝裂霉素处理后会有细胞死亡，且因为细胞状态不好，处理后铺好的饲养层容易卷边，明胶包板会好一点，但用这样状态的MEF养ES不好！

作者: iseeyou1210 时间: 2010-9-9 18:46

你们都是在复苏细胞的当天做用mmc处理MEF呀?

作者: iseeyou1210 时间: 2010-9-9 18:48

feeder should be prepared in batch and frozen down.
in this way, you can control the quality.1 z8 k& p+ M/ R) W0 p' S$ J
if you do the feeder everything before the thawing the ES cells, I am not sure you can keep the consistency of your experiment.

作者: cony 时间: 2010-9-14 21:56

谢谢大家。首先MEF出现这种情况现在觉得是细胞状态不好，加上没有铺明胶易在MMC处理时发生收缩脱落。现在养ES有了很大的进步，一是feeder先MMC处理后冻存，二是复苏ESC的前一天才复苏MEF，且明胶包被30分钟，当前处理当天接种确实不太好，三是ESC最好隔天传代，每天换液，现在ESC长得还满意。
大家互相交流学习

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