干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 细胞是不是分化了？ [打印本页]
作者: missyoudad    时间: 2010-5-5 15:33     标题: 细胞是不是分化了？

小鼠MSC，传代后P1就出现这种情况。请各位高手看看，是不是已经分化？为什么会出现这种情况呢？
, c" `. P* z& l+ K# l, d& M自我分析了下原因，是不是传代时消化时间过长？
作者: missyoudad    时间: 2010-5-5 15:34

另外，上面那些可以称之为一个集落吗？CFU计数是计数这种克隆吗？
作者: Jocelyn    时间: 2010-5-5 16:55

你的Ｐ１代是几比几传代的~?~
作者: zhangmingqi111    时间: 2010-5-5 20:04

我养的细胞也出现这样情况，这种不是分化吧？这种才是增殖的细胞，从一个克隆团开始出现增殖
作者: missyoudad    时间: 2010-5-5 22:05

1:3传的
作者: kqyy    时间: 2010-5-5 22:41

我的意见:
/ O# D( B7 J$ D( u9 p1\如果你的图片是同一瓶细胞,说明你没有种匀,并且分化很明显.' E" Q9 @, x: n
2\后面的图片的确是集落,是增殖的细胞，从一个克隆团开始出现增殖
作者: ambassador    时间: 2010-5-6 09:54

我的意见:
# W+ C( @" H$ d8 ^; t5 Q1\如果你的图片是同一瓶细胞,说明你没有种匀,并且分化很明显.
9 }  i, g4 p, D2 z1 |" H2\后面的图片的确是集落,是增殖的 ..., P$ S) v4 q  D
kqyy 发表于 2010-5-5 22:41
- \% I8 |$ }; D0 `6 u( z
  U) H, N" r, K. T
$ }. d! \& b2 P1 g
    如果是同一瓶，你所说的不是矛盾么？集落和分化怎么区分呢？
作者: hawkyiger    时间: 2010-5-6 10:53

我想大家可能都遇到过这种情况，就是MSCs在传了几代后慢慢变成大的扁平型细胞。有些文献也介绍过，就是MSCs包括两种可辨的不同类型的细胞：RS细胞（小的，快速增值的）和大的扁平状细胞（增值慢）。前期小的细胞占优势，经过一定代数，后者占优势，碱性磷酸酶活性升高。但说的是原代就有这两类明显区别的细胞，因此也说不上是由分化得来的。
作者: hawkyiger    时间: 2010-5-6 10:54

[attach]7351[/attach]上传一下那篇文献
作者: missyoudad    时间: 2010-5-6 14:45

谢谢，学习了。
作者: askage    时间: 2010-5-6 16:02

谢谢老兄的文章，很需要
作者: askage    时间: 2010-5-6 16:10

我做人脐带MSC培养，在原代或P1代后期也呈出现过“分化”现象。大多数细胞扁平，象银杏叶。因为细胞较少，无法流式检测，继续传代培养到P2，长到80%。这期间发现扁平的细胞减少了，密集的时候梭状感出来了。收集起来流式检测：CD29,CD73a、CD90,CD105,CD106,CD166,CD14,CD34,CD45,HLA-II,跟以前的一样,未发现哪个标志异常。（注，我们的流式检测和韩忠朝老师他们的检测结果唯一一个区别是CD106，他们报道是弱阳性，我看过他们的流式图，跟我们的图几乎是一致的，我们判断是阴性。当然，我们也是刚接触流式，可能出错。）
作者: zhangl    时间: 2010-5-6 22:08

MSCs传代后大的扁平细胞（增值慢）会增多，这是不可避免的，但在细胞密度在70%左右传代，可以减少大扁平细胞的比例（不要长滿了再传）。另外传代时细胞不能太密。如果大部分细胞都是扁平细胞了，那您就需要重新再提细胞了。因为有报道大扁平细胞虽然还具有分泌细胞因子的作用，但其增殖分化能力是下降的。
作者: zhangl    时间: 2010-5-6 22:15

传一篇文章供参考。
作者: missyoudad    时间: 2010-5-7 16:35

但是这种情况要怎样处理呢？
作者: missyoudad    时间: 2010-5-7 16:35

文献说传8-10代都是没有问题的吧。这才第二代啊？
作者: missyoudad    时间: 2010-5-7 16:36

是不是应该添加些抑制细胞分化的因子？还是调整接种密度？请不吝赐教。
作者: gfzlee    时间: 2010-5-17 20:21

回复 17# missyoudad
* f7 f' |% d7 N, _" j: d" }0 K  M  N/ L

# s( b" y6 \. o) b4 ^+ ^/ n5 h* ~    请问你细胞形状改变的问题具体原因弄清了没有，怎么解决呀？$ T1 _/ V, @- Z4 x

1 V6 i: l  b: y" J- Z谢谢
作者: helen841102    时间: 2010-5-19 16:01

望得到答案
作者: decloud2009    时间: 2010-5-19 20:17

看你的细胞好像有好多小点点，换液的时候，旧的培养基里有黑色的小点点吗？
作者: missyoudad    时间: 2010-5-19 20:30

旧培养液挺干净的。没有问题。



欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/) Powered by Discuz! X1.5