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标题: 脐血MSC和红细胞裂解液的讨论 [打印本页]

作者: mbpsky 时间: 2010-5-12 09:48 标题: 脐血MSC和红细胞裂解液的讨论

请问一下战友们: @% {$ D. p y+ G( Q
你们分离MSC时脐带血用红细胞裂解液吗？
请用的战友介绍一下配方和用法6 Y/ ]$ F7 y8 ~
先谢谢了！

作者: echo 时间: 2010-5-12 10:10

养间充质的时候，不用裂解液也可以的。脐血分离后红细胞是挺多的，但是直接贴壁来养间充质没有什么问题。

作者: mbpsky 时间: 2010-5-12 10:49

回复 2# echo / o' T0 E0 }7 }
1 p+ N/ w) M$ G6 s" W+ i
* @& I" d* f8 ]* K& o/ i$ r
直接贴壁效果不好吧，细胞不纯...尤其是脐血的..都是幼细胞，贴壁能力也很强的

作者: Robert-A 时间: 2010-5-12 17:16

养MSC不用裂解液，如果你想用的话可以用氯化铵或高渗氯化钠都可以的

作者: echo 时间: 2010-5-13 14:57

回复 3# mbpsky
* n- K4 n. V* b: c3 h2 E/ B

摸索换液时间应该还可以。

作者: willow0711 时间: 2013-8-27 14:03

回复 Robert-A 的帖子
5 Y3 {' {% Q; M+ D
你好，请问你说的氯化铵或高渗氯化钠的具体浓度是多少？怎么配置？作用是多长？谢谢

作者: 金戈 时间: 2013-8-27 14:56

脐带血中间充质细胞的含量很低，比骨髓还低

作者: 金戈 时间: 2013-8-27 14:57

氯化铵红细胞裂解液（10×的储存液）, S# O% z3 w- i0 U: ^7 w. f
80.2 g NH4Cl (1.5 M)8 W, @' U+ W: P& ^
8.4 g NaHCO3 (100 mM)
3.7 g EDTA二钠 (10 mM)
加水至900ml，然后用1N的HCl或1N的NaOH调节pH值至7.4。最后加水至1升。3 F6 g' j. g" @ w- y6 V
该10×的储存液可在4℃保存6个月。' ^8 p. N, I1 {; X: k
工作液的配制：在使用前蒸馏水稀释10倍即可。（1份储存液加上9份水）。工作液用来裂解红细胞。

作者: 金戈 时间: 2013-8-27 14:58

脐带血中间充质细胞的含量很低，比骨髓的还低，所以有可能会分离不成功。

作者: jxaf3900824 时间: 2013-8-27 16:28

可以不用红细胞裂解液，贴壁生长挺好。2 ^+ s0 H* p# h3 E. {: O4 z

作者: willow0711 时间: 2013-8-28 10:49

回复金戈的帖子

哦，裂解红细胞时，细胞密度是多少？工作液和细胞悬液的比例是多少？要作用多长时间呢？谢谢您

作者: 金戈 时间: 2013-8-28 19:13

回复 willow0711 的帖子 w: i$ J! Z9 c4 }" ~& W* G
" N' s! ]2 [: j X% z& N+ S) A
细胞用离心后的压积，不用悬液。加的体积比例要看你样品中红细胞的量。比如外周血，红细胞比例比较高，就要多加，如果你消化的组织红细胞量少，就可以少加。9 \/ O5 t( |/ R& f

加入约5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。8 I, e% E+ q4 E8 F. U0 V
例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入6-10ml的红细胞裂解液。裂解
2-5分钟，加入培养基或PBS洗涤离心。如果一次裂红不完全，还可以再重复一次。

作者: willow0711 时间: 2013-8-29 16:15

回复金戈的帖子 [7 |. j) A1 J9 ?

哦，非常感谢您！我记下了！

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