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标题: 磁珠分选CD133肿瘤干细胞经验之谈 [打印本页]

作者: jitianxing7021 时间: 2010-5-12 14:43 标题: 磁珠分选CD133肿瘤干细胞经验之谈

大家好！我最近在分选CD133肿瘤干细胞( {, _/ X# Z2 G% G) J1 x
但是经流式分析表明CD133分选之前和之后没有区别！望各位战友们能给点建议！- ?6 k0 Y, B) J$ M
谢谢！

作者: zzdqyaya 时间: 2010-5-12 21:15

1。你所用的磁珠分选磁珠是哪家的，分选的过程顺利吗？我最近也在做这个，过程不是很顺利，总是堵。所以想和你交流一下。
2。在流式分析中你用的抗体和磁珠的抗体标位是相同的还是不同的，之前就这个问题请教了厂家技术，他们说要选择不同标位的抗体。因为这样检测的时候，可以不受磁珠标记的抗体占用的表位的影响。

作者: dwc326 时间: 2010-5-12 21:22

本帖最后由 dwc326 于 2010-5-12 21:23 编辑 ! g: [2 s9 @& I# m6 {/ i' G
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我也是用磁珠分选肿瘤干细胞。分选后阳性率在70~80%，应该还可以了。
我是查了文献，在乳腺癌和结肠癌中分选CD44阳性细胞，前列腺癌也在考虑之列，但是实际操作中标本不易获得，所以基本上就是前述两种肿瘤了。抗体用的是Miltenyi的。
我想你是不是要获得CD133阴性细胞啊。其实我们也发现一个现象，分选阳性细胞的阳性率在70~80%，而分选阴性的细胞阳性率与未分选的细胞无明显差别，分析原因可能是“阴性细胞”中还有大量的细胞碎屑以及其他组织中各种复杂成分。
不知道你是要分阳性的还是阴性的细胞，不好说啊！！！

作者: zzdqyaya 时间: 2010-5-12 22:22

本帖最后由 zzdqyaya 于 2010-5-12 22:26 编辑

可能是网速的问题，才发现相同的帖子发了两遍，不好意思，不是有意的，删不掉了。

作者: jitianxing7021 时间: 2010-5-13 14:13

我用的是美天旎公司的
是按照他们的PROPOTAL做的
感觉分选后用流式细胞仪器分选纯度达不到
你的堵住可能是由于你消化细胞不足，没有将其处理为单个细胞悬液
还有个问题/ N1 p: T" f* l
大家磁珠抗体和荧光抗体孵育的条件和时间是多少了？

作者: wzx6660 时间: 2010-5-18 11:09

学习中，谢谢各位

作者: aban_61 时间: 2010-5-24 10:19

同学习

作者: bjchen789 时间: 2010-5-24 16:20

1. 关于堵的问题：一定要过滤，30um过滤网过滤后再入分选柱。& k" t @3 U1 ^- V/ c0 [
2. 分选得率的问题：要计算一下总细胞数，再考虑分选柱的分选量的
3. 流式分析：分选的抗体用的克隆号是AC133，那么流式分析的抗体要使用另外的克隆号：比如293 . 磁珠只占细胞表面抗原的的30%，剩下的抗原要使用另外的克隆号；

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