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作者: 火云豹    时间: 2010-5-24 21:30     标题: 讨论

在培养肿瘤干细胞的时候  培养基中要加入胰岛素 大家都是怎么溶解的呢

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作者: ambassador    时间: 2010-5-24 22:03


) }% k" _" |$ X. F& N' W. `3 ^* m# a/ E7 _! t
你是说加胰酶吧！8 O2 z7 J$ d: }6 o2 X
我们以前养海拉细胞的时候，大概是这样的流程：2 L4 v: p) G, c* x3 r6 b2 B
1.胰酶和EDTA(按一定比例，我忘了具体多少...)称好以后，
6 C; V) v- c  x( u, Q: ^+ C) G2.用双蒸水溶解，3 C3 ~3 Q# r  m/ e. z$ \6 M* q- c
3.电磁搅拌仪搅匀，6 }7 T2 ^6 \6 q# I- K% J8 a
4.再微孔滤膜过滤

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作者: daviddow    时间: 2010-5-24 23:51

你看看sigma那里有说明，胰岛素是怎么溶解的。那里有个单子，是说各种物质的溶解方法。我就不给你找了。要是你找不到，就联系我

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作者: 火云豹    时间: 2010-5-25 10:51

呵呵 我这里每次来的sigma的产品都没有附带说明书 很麻烦

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作者: chuanbaozang    时间: 2010-5-25 11:08

用1ml的酸化水溶解10mg胰岛素，溶解过滤分装，使用终浓度为10ug/ml。
* W1 i! s1 Z4 R5 q5 x" O酸化水是100ml中加1ml左右冰醋酸，调节pH为1.9左右，高压灭菌，冷却即可。+ z6 ]" u6 D% n- B/ r+ X' l* O8 G
如果在超净台中打开sigma的胰岛素原装，我个人认为可以不过滤灭菌的。0 o% J0 J2 @) U. _7 s, Q/ V
以上仅供参考。

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作者: angel-sakura    时间: 2010-5-25 12:31

回复 2# ambassador
1 P) N5 M$ @! C2 Y9 h" Z. ]: t$ i用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。

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作者: ambassador    时间: 2010-5-25 13:54

回复  ambassador
' [( N# t+ w! b0 I. z1 f用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。9 d: M" H- D# y0 w6 K
angel-sakura 发表于 2010-5-25 12:31

: ?: x0 U* Q7 ^" b

# a! z. E, s6 L9 c  q1 x+ Z
' z: ~) I0 d" |0 e1 _    可能我们那时没买PBS，是用胰酶与EDTA按一定比例来调节渗透压的。

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作者: haijunlv2004    时间: 2010-5-25 17:55

1ml冰乙酸加到100ml双蒸水里制成酸化水，100 mg Insulin 用27ml 酸化水溶解，浓度约为100U/ml，过滤除菌，分装成1ml/EP管，-20℃保存。
, Z* D( W9 p1 I用时先将1ml的储存液溶于5ml Hepes 中，再加入到500ml 培养基，终浓度约为0.2U/ml。
' I; ?9 N/ v2 D/ C切勿直接将1ml储存液加入500ml培养基，会导致无法溶解。

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作者: 火云豹    时间: 2010-6-3 09:06

大家各抒己见 结合现有情况实践中

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