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标题: 关于神经干细胞分化的问题 [打印本页]

作者: guojingjing 时间: 2010-6-2 22:15 标题: 关于神经干细胞分化的问题

最近在做神经干细胞分化实验，以前我们也做过，使用的方法也是比较成熟的：将D/F12+EGF+bFGF培养得到的neurosphere分散为单细胞后种在PLL包被的coverslip上，细胞用D/F12+1%FBS分化七天。以前做的都挺好，最近用的海马神经干细胞，已经鉴定过nestin+,但是更换为分化培养基细胞基本在第二天就死光了，碎片很多，最后几乎没有细胞贴壁了。6 z; j5 K) N& G* x0 S$ X/ F% B1 o
大家帮忙分析分析这会是什么原因，谢谢！

作者: qingyueqingfeng 时间: 2010-6-3 20:03

在诱导分化前的细胞状态怎么样？我在做分化观察到分化前细胞状态一定要好。

作者: guojingjing 时间: 2010-6-7 21:01

回复 2# qingyueqingfeng

状态挺好的，用同样的细胞做增殖实验就没问题

作者: cortex 时间: 2010-6-8 17:17

建议加一些神经干细胞分化的因子，可能效果好一些。例如：N2，B27，ITS等。因为，不同的细胞株系以及不同物种可能存在或多或少的差异，不管怎么说，楼上的可以试试。

作者: guojingjing 时间: 2010-6-10 19:13

回复 4# cortex
$ H3 M; c1 H. s
$ ^3 V% L+ i, X; A$ Z3 q
我们的分化培养基中是加了B27的，可是还是状态不好。不知道能不能提高血清浓度

作者: cortex 时间: 2010-6-11 09:30

不同的人分化方法不一样。而且方法非常之多。做分化时，不一定需要添加血清啊！应该来说，养起来是比较容易的事情的。不过，不同的细胞株系可能也存在差异。

作者: shewawa 时间: 2010-6-28 00:55

回复 1# guojingjing
是不是细胞感染了呢？我只做过些细胞分化真在做神经细胞分化，想向楼主请教下神经分化的protocol。还想请问神经分化后的细胞团贴壁状况如何，我的细胞贴壁状态很差，请问有什么好方法，使细胞更容易贴壁吗？

作者: angelyannan 时间: 2011-8-17 23:51

回复 guojingjing 的帖子

我现在遇到了类似的状况，培养基是一样的，只是FBS的浓度时0.5％，用的是胎鼠E14.5d的大脑皮层，培养的前两天细胞状态比较好，从大概从第三天开始有部分凋亡，细胞悬浮起来，直至第五天细胞死亡量增加，贴壁细胞变少。不知道楼主的问题解决了没有？是不是和细胞的接种密度有关呢？

作者: angelyannan 时间: 2012-9-29 13:30

回复 cortex 的帖子

您好，请问诱导神经干细胞分化培养基中是否添加血清有怎样的依据？为什么很多文献回选取添加血清呢？而且浓度不易从0.5％到10％都有，而有些文献中有会添加其他的因子，我们如何根据自己的实验目的选取呢？2 y/ Z }! T& t/ F3 q' |

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