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标题: 怎么样用耳部细胞制作成纤维细胞？ [打印本页]

作者: sniper 时间: 2010-6-21 15:56 标题: 怎么样用耳部细胞制作成纤维细胞？

哪位前辈能介绍一下用山羊的耳细胞制作成纤维细胞的方法啊？最好详细一点，不胜感激

作者: baixueyao029 时间: 2010-6-21 23:13

从山羊耳朵剪到一部分，用加双抗的生理盐水或PBS反复冲洗，用两个镊子把耳朵的皮肤撕掉，剪碎，组织块培养。我前一阵子刚养过，不过是牛的

作者: sniper 时间: 2010-6-22 09:57

不用消化吗？组织培养用什么培养基啊？谢谢

作者: baixueyao029 时间: 2010-6-22 12:48

回复 3# sniper + {. v' j v5 a- N3 U

我没消化，不知道其他人消化没。就是普通的细胞培养液（DMEM+血清），反正我能养出来，呵呵

作者: cortex 时间: 2010-6-22 19:14

楼上所用的是组织块培养法，当然也可以，最好还是消化一下，培养基就是楼上所说的那样，但是里面必需加大量的双抗。

作者: 大猪小猪落玉盘 时间: 2010-6-23 11:04

本帖最后由大猪小猪落玉盘于 2010-6-23 11:10 编辑

这位研究员是不是刚开始从事细胞培养？因为看你发的帖子，对细胞培养基础知识不太熟悉。8 k: B8 k) b h. u
目前培养贴壁细胞，一般都会采用组织块和酶消化法进行原代细胞的分离培养。至于采用什么方法，要根据自己实验需要进行选择。因为用组织块培养法分离出来的成纤维细胞比较纯，在后面筛选过程中比较方便，可以获得低代较纯的细胞，现在用于动物克隆的细胞系一般都采用此种方法。缺点是：原代生长周期比较长，依我的经验，快则一周，慢则半月。而利用酶消化法，相对比较快，24小时细胞就可以贴壁，相对较快。但是，酶消化法似乎对细胞损伤太大，而且酶消化法获得的细胞纯度不够，需要1-2代的筛选。8 c6 Z- ?* c- H0 r
总之，还得看你实验条件及实验要求进行选择。
我看你是保定的，如果还没搞定此事，可以到河北大学动物科技学院桑润兹教授或者李湘运教授实验室进行请教！！

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