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标题: 间充质干细胞的冻存配方 [打印本页]

作者: beidouhan 时间: 2010-6-24 09:58 标题: 间充质干细胞的冻存配方

请教一下，大家培养间充质干细胞的冻存都是什么的，我用的是90%血清和10%的DMSO,效果不是很好，想换，给些指导意见吧

作者: beidouhan 时间: 2010-6-24 10:26

大家快来帮帮我吧

作者: study 时间: 2010-6-24 10:52

我没有做过，不过看到过有用含10%DMSO、10%胎牛血清的DMED/F12培养基的冻存液的，可以试试看。

作者: beidouhan 时间: 2010-6-24 10:59

谢谢，是一个方案，还有别人知道的吗

作者: nhzxcsc 时间: 2010-6-24 12:26

血清浓度太高了，血清的营养是不全面的，这样冻存肯定是不行的。1 S& b- `6 O1 Q; C
合适的应该是10%DMSD+平时饲养浓度2倍的FBS+平时使用的培养液

作者: beidouhan 时间: 2010-6-24 12:58

恩，值得考虑，大家冻存的时候细胞密度是多少，我们是1ml，3*106

作者: dlzhang 时间: 2010-6-24 14:00

细胞冻存液的配置有培养液：血清：DMSO=6;3:1,不知这种配置是否适于骨髓间充质干细胞？对于骨髓间充质干细胞也有人用培养液：血清：DMSO=4;5:1,或者血清：DMSO=9：1---------------------------------以上是我在网上查的，马上要开始做间充质干细胞了，强力顶起

作者: beidouhan 时间: 2010-6-24 14:37

谢谢了，有细胞密度的差别吗

作者: dahui 时间: 2010-6-24 17:23

这个应该问牛人，

作者: xbs530515 时间: 2010-6-24 21:35

除了冻存液，也要考虑一下冻存的步骤，如降温的程序。一般是4度30min，-20度30min，-80度过夜，然后放液氮。我冻存细胞用的是90%FBS+10%DMSO，感觉比10%DMSO+90%完全培养基要好，可以试试10%DMSO+20%FBS+70%培养基。你可以用一次来比较一下几种冻存液的性能。

作者: beidouhan 时间: 2010-6-25 14:53

非常感谢了

作者: haoxinaok 时间: 2010-7-6 20:46

学习！

作者: morning860 时间: 2010-7-7 10:15

我冻存时是用10%的DMSO+40%的FBS+50%的平时培养基，冻存时的温度梯度是4度5—10分钟，-20度30分钟，-70度过夜，最后放液氮。

作者: 011spring 时间: 2010-7-9 09:19

4度30min，-20度30min，-80度过夜，然后放液氮。。这个冻存步骤可能比较好一点。

作者: yinxiangyu6666 时间: 2010-7-10 01:02

合适的应该是10%DMSD+含50-60%FBS的培养液

作者: 云水缥缈 时间: 2010-7-18 07:47

我用的是细胞冻存液的配置有培养液：血清：DMSO=7:2:1过程是4℃1h，-20℃1h，-80℃1h，然后放液氮永久保存。感觉效果还可以

作者: zx19851985 时间: 2010-7-19 09:10

本帖最后由细胞海洋于 2010-7-19 09:30 编辑 ; ~. u( ?( B% l: X/ P" l3 @

DMSO:FBS:DMEM=1:3:6, 冻存液ml=细胞数/10的6次方，我冻的有10的5次方的，密度太小了，还没复苏，建议密度稍大些，可以分管

作者: zx19851985 时间: 2010-7-19 09:11

上贴中

为“：”“D”

作者: cl5823283 时间: 2010-7-21 10:50

冻存细胞用的是90%FBS+10%DMSO我用的挺好

作者: cdl613 时间: 2010-10-28 18:33

不错！

作者: dwl1209 时间: 2011-11-22 16:38

请问各位，用10%的DMSO+完全培养基配方，复苏后的活率都有多高呢？能不能达到90%呢？冻存时如果用到冻存盒，是不是就不用放到4℃和-20℃冰箱过渡而直接放入-70℃冰箱呢？

作者: 大少爷 时间: 2011-11-22 17:07

90%培养基和10%的DMSO,配成冻存液。然后和细胞悬液一比一混合。

作者: linghuchong123 时间: 2011-11-23 16:19

我们都是10%FBS和90%血清，复苏效果都行

作者: songxinxing 时间: 2011-11-23 16:43

回复 xbs530515 的帖子0 Y& ~9 k6 p0 q4 w; b
9 R: p- v) z; g3 X! U
直接用冻存盒不是更方便么？

作者: SunYouLa 时间: 2011-11-24 08:32

我们实验室的是 FBS:培养液

MSO=5：4 ：1

作者: azzyou 时间: 2011-11-24 09:09

本帖最后由 azzyou 于 2011-11-24 09:37 编辑
( u P& [4 u3 A8 V( Y9 \, w( v
我们做的脐带间充质干细胞,冻存液是40%培养基+50%FBS+10%DMSO.

作者: azzyou 时间: 2011-11-24 09:16

回复 beidouhan 的帖子( [! ~1 p# p# I/ |* ^
( Y6 h3 s9 A: l* W
我们是用培养皿培养的，长满了以后冻存差不多是每毫升5-6*106个

作者: azzyou 时间: 2011-11-24 09:19

本帖最后由 azzyou 于 2011-11-24 09:36 编辑 9 v7 w& d* K, j

关于冻存液，我们做的脐带间充质干细胞是配的血清：培养基：DMSO=5：4：1的冻存液

作者: 张俊克 时间: 2011-11-24 09:23

回复 beidouhan 的帖子0 y; T( @/ p. b9 L
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血清：培养基：DMSO=5:4:1的比例效果挺不错的，可以试试看。

作者: azzyou 时间: 2011-11-24 09:24

回复 dwl1209 的帖子
5 H5 @6 x% h% P' x
冻存盒本来就是一度一度下降的，符合细胞冻存缓冻的要求，所以不用放在4度，再到-20度去过度了，直接放到-80度，再转移到液氮就行了。

作者: Demon_CN 时间: 2011-11-24 10:00

我刚做完冻存复苏实验，用的细胞是脐带间充质干细胞。. L* l7 f/ d9 K5 ^+ m/ k
冻存配方10%DMSO+75%低糖DMEM+15%FBS
复苏形态很正常，活率在90%以上，补充细胞入液氮罐3天

作者: 帝国黑骑士 时间: 2011-11-25 09:03

大多都是用DMSO:血清=1:9的比例做的，不过在你用之前提前几分钟配好，放冰箱里比较好一些。

作者: bulu123 时间: 2011-11-30 17:24

我一直用 dmem/f12:fbs:dmso=7:2:1 效果不错

作者: 漂泊的风 时间: 2011-12-1 16:16

细胞冻存液的比例到不是绝对的，凭个人经验觉得培养基：血清：DMSO=4：5:1的效果比较好。

作者: wangyimei 时间: 2011-12-12 13:47

间充质干细胞的冻存，我们一般用培养基：fbs:dmso=5：4:1' [" z; r3 ~, ], ? O
加入好冻存液混合好后，然后用棉花包好，放入-80°冰箱过夜，第二天下液氮

作者: chrismine 时间: 2011-12-17 13:44

推荐试试7：2：1的比例试试，我们实验室一直都是这个比例

作者: signext 时间: 2011-12-20 13:03

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我也是7：2：1 效果感觉不错8 ]& p/ \2 G- @
至于冻存程序，没有冻存盒，我是用棉花把冻相聚管包起来，扎紧，放到四度意思一下，待个十几分钟，－20度待个几十分钟，再投到负80，因为很快就用，就没往液氮里转，七个月之后复苏，70%以上的存活吧，生长良好，可见负80至少放半年没问题的。
关键词：慢冻速融嘛！

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