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标题: 有关猪的IPS问题 [打印本页]

作者: chenxin 时间: 2010-6-29 15:31 标题: 有关猪的IPS问题

有没有人关注猪的腺病毒或载体进行ips的问题，希望找到志同道合的人，讨论一下实验中遇到的问题

作者: ambassador 时间: 2010-6-29 20:44

看到猪，感兴趣进来的~我们还没做iPS，你可以讲讲你们是怎么做的？: [4 D' M e- K; _

你们做iPS的目的是什么呢？作育种吗？

作者: stonelee2050 时间: 2010-6-29 21:15

我打算9月份开始做呢，正在查文献学技术了。关注关注！

作者: 大猪小猪落玉盘 时间: 2010-6-30 13:58

目前国内做猪的IPS细胞系的主要有广州医药与健康研究院和上海肖磊那里，还有深圳华大基因、北京畜牧研究所、南开大学、中国科技大学等等，可以多联系交流，共同提高！！

作者: cicadacjk 时间: 2010-7-3 14:50

建议你不要选这个题
目前连逆转录病毒和慢病毒，都做不出来真正的猪iPS（三篇文章也好，这次旧金山的大会也好，都没有见到外源不沉默的）。
就算你铁了心要试，也不建议你做腺病毒，小鼠腺病毒文章仅有一篇。从感染效率讲是不低，但重复性是很差的，应当是因为病毒感染导致细胞内部产生不利于重编程的变化。

作者: 上海过客 时间: 2010-7-3 15:11

建议你不要选这个题) o" U( D% j0 v# {
目前连逆转录病毒和慢病毒，都做不出来真正的猪iPS（三篇文章也好，这次旧金山的大会也 ..., O# ]7 B3 Z4 J, c# e- s
cicadacjk 发表于 2010-7-3 14:50

+ W7 R: W2 q3 m# ~$ k0 L. v7 S
' N3 [: M, H4 Z% A3 y" h
你这么一讲，我到觉得  “猪的 iPS 为什么做不出来” ，倒是一个很好的课题啊。  c6 l8 k* v1 D1 z/ M

人的都可以了，猴子的也可以了。但是猪的得不到。  细微的问题是什么呢？
0 Y( w/ ]7 C! I+ b; b) j; a
1 信号通路的问题吗？
2  培养基 5 c  a8 W5 ?; T8 N* o& H2 G4 ^
3  转基因的基因问题  ，不被甲基化识别？

作者: cicadacjk 时间: 2010-7-3 15:28

个人观点6 q$ @; [- t/ @
, _: {2 S# S: e' a0 C; M3 ^* i+ ?) L: [
培养条件尚且无法支持猪的胚胎干细胞状态
4 y! K- Y8 a# b, O6 a; [
例子：大鼠的ES做了20年' G+ Y# }1 R0 o/ ]& G! F0 V' g
人的ES状态还没被广泛认可

作者: 上海过客 时间: 2010-7-3 15:33

最近有类似小鼠ES细胞培养形态的Human ES 细胞培养文章。可以借鉴一下吧？; n7 L8 I- R2 D9 M

不知道猴子的ＥＳ　细胞　能不能得到嵌合体　？　　

作者: qizhi502 时间: 2010-7-6 23:04

回复 5# cicadacjk

5 n& p* F7 O% T( i
1 逆转录病毒在多能性细胞中会沉默，人的和小鼠的都可以，而猪为什么不沉默呢？这个问题确实比较困惑人，如果条件诱导（cre-loxp），是不是外源沉默细胞就传不下去了？
2 猪的不出来是因为还没有真正ES 出来，连个对照都没有。不过最近出来类小鼠的HES 方法确实值得借鉴

作者: cicadacjk 时间: 2010-7-7 13:16

对于8楼9楼的问题
我的观点是3 f. y" s* o0 N) I# V
1. 类小鼠的HES是依靠过表达5个因子维持的，但我们不知道其天然状态到底是跟小鼠一样，还是一种区别于当前mES和hES之外的一种状态。
2. 在猪里面尝试得到这种细胞也很有趣，内源是全部开放的，只是在这个基础上组成型表达几个因子。目前尚无类似报道。' L4 R" H7 i8 X& `9 [5 D0 i# p
3. 猴的胚胎操作还比较困难，但我自己推测现在的猴iPS是无法做出嵌合猴的。' C' O) A/ ~$ J7 n: x% u
4. 逆转录病毒沉默是重编程最后期的事件之一，这只能证明所有尝试都还没有进入最后一个阶段。

作者: zhao008 时间: 2010-9-14 11:14

是啊连基础培养基里到底是加LIF还是加bFGF都不清楚~~~

作者: 张也行 时间: 2010-9-14 11:30

回复 7# cicadacjk : J: R3 d5 {5 q: O' w
, M3 B+ p2 l# X8 w% D* `
我很同意你的说法。4 J- {5 `( u+ [ o0 _6 ^
现在感觉一切跟猪相关的研究进行的都很不顺利。而对于猪的iPS细胞，我觉得最大的问题就是没有参照——猪ES细胞。大鼠好像是现有iPS再有ES，加抑制剂的方法。希望在猪里也能成功！

作者: 张也行 时间: 2010-9-14 11:31

回复 8# 上海过客
4 @3 `9 F3 r5 u9 H
灵长类的动物好像做不成嵌合体吧？跟人的都很相似。

作者: 张也行 时间: 2010-9-14 11:33

回复  cicadacjk
% p* _7 ?; e( s
4 e2 i3 q( w! B( S% P  C7 k- D, _2 U+ `$ j+ U8 E
1 逆转录病毒在多能性细胞中会沉默，人的和小鼠的都可以，而猪为什么不沉默呢？这 ...
  b5 y6 C  T( I# k, B% mqizhi502 发表于 2010-7-6 23:04

+ Q7 }) n& z! m. [4 D* a' {+ e, s; B9 u5 X

请问你说的“小鼠的HES 方法”是哪一个，能把全文上传一下吗？你说的是小鼠的EpiSC吗？

作者: 张也行 时间: 2010-9-14 11:40

回复 10# cicadacjk
! |3 i7 d; A# X/ \7 j( ]
也很同意你的这个说法！% U; [* H. {- j6 d3 O
建立ES最好的做法是模仿内部的环境，但是完全的模仿是不可能的。关键是你要做哪一个方面。 V# y; e" x% b7 O& A0 Y# v
“类小鼠的HES”是一个不稳定的状态，必须依赖于5个因子（OSKMN）的维持。我觉得这说明维持内源多能性基因表达的信号通路没有找到。并且单一一个信号通路很难完成，必须要多个因子相互组合，共同抑制分化，维持多能状态。

作者: cicadacjk 时间: 2010-9-14 12:48

回复 15# 张也行 # `$ C1 \) o1 v- j) D

2 G& A" h2 o6 q8 Y' F2 r8 S* @
看来你已经找到那篇文献了。

关于不同物种的ES到底会不会一样，我提几个事实，你可以考虑一下：
1. 去年有一篇Science报道Tdh这个酶在小鼠的self-renewal中非常重要，而人的这个酶是失活的，所以人的苏氨酸代谢是走的不一样的通路。如果这个酶很重要，那么人的所谓native ES又怎样维持呢？
2. 大鼠的ES固然是建立了，并且获得了p53 KO的大鼠（Ying‘s lab）。但大鼠的iPS仍然没有生殖系传递，甚至丁胜做的嵌合仍然有争议（大鼠的腹部花纹在杂交情况下也会出现黑白相间），难道没有人期望做出一个大鼠的生殖系传递iPS吗？答案是有人在做，而且还不少人在做，但……' g& g7 _5 |; o
3. 小鼠的epiES，Dppa3（stella）、Nanog、Rex1(ZFP42）的表达都很低，而human ES都不低，信号通路的requirement不能简单用来区分细胞类型，epiES与hES有共性，但推测他们是一样的，就有点形而上了。

作者: 张也行 时间: 2010-9-14 23:56

回复 16# cicadacjk % X2 Z' \0 w4 N9 R+ r i
) P" g. q2 g* O. Q$ |
你说的很有道理。很高兴和你交流！
ES细胞多能性从进化的角度来讲在发育的过程中是十分关键的一个特性，所以很可能维持细胞多能性的信号通路有很多个相互平行，他们在上游或许有很大的不同，在不同的物种可能表现出很大的差异，但是他们最下游的关键基因比如Oct4等表达的变化却在不同物种中表现的很一致。所以，我觉得最重要的是把握多能细胞维持的关键几个因子，其中最关键的或许是Oct4吧。其他的差异或许并不是很关键，只不过是处在不同的通路上吧——殊途同归嘛。7 \" M, g( N: L
“信号通路的requirement不能简单用来区分细胞类型” 很感谢你的提醒。你说的很有道理。信号通路是研究多能性的一个维度，但不是唯一的一个。多能性是一个多维的现象——可以从多能性基因，表观遗传，信号通路，细胞连接等考虑，真的很fascinating。我现在的知识很有限，希望将来能将这些看似很散乱的点连接起来。

作者: taoqilh 时间: 2010-9-16 21:02

我认为之所以猪IPS的状态不是很好，外源基因不沉默，我觉得最重要的是因为细胞有个筛选压力，压力就造成了外源基因的无法沉默

作者: exin11 时间: 2010-9-16 21:15

支持一下，没做

作者: zhao008 时间: 2010-9-20 22:30

我认为之所以猪IPS的状态不是很好，外源基因不沉默，我觉得最重要的是因为细胞有个筛选压力，压力就造成了外 ...1 t) C; k3 q' b- k7 N& _
taoqilh 发表于 2010-9-16 21:02

7 m" W* M9 d2 b) A0 J3 f
. ?# L; [6 H8 T; l L# j

这个说的没有道理~~~用转座子系统和诱导性表达都无法沉默这说明什么
还是细胞通路的问题

作者: gadfly2008 时间: 2010-9-22 00:14

呵呵做这种模式生物还是比较有前途的

作者: aceman 时间: 2010-10-12 09:12

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