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标题: MEF 到底是一种什么性质的细胞？是单一的细胞？肌纤维细胞，神经纤维细胞？ [打印本页]

作者: 上海过客 时间: 2010-6-30 10:36 标题: MEF 到底是一种什么性质的细胞？是单一的细胞？肌纤维细胞，神经纤维细胞？

MEF 到底是一种什么性质的细胞？是单一的细胞？内胚层细胞，肌纤维细胞，神经纤维细胞？是均一还是不均一的细胞？
: A" F! ~& i6 ]/ @, T: U; n
越做越有疑问，这种细胞的性质到底是什么样的？
( K# X1 c. P8 R# u4 `
谁能给一篇综述。或者谈谈 MEF细胞的特性？

作者: shewawa 时间: 2010-6-30 14:28

回复 1# 上海过客 ; P" J4 E* ]0 t
# r! W# r; e: M! J9 s
MEF 是Mouse embryonic fibroblast的略称。

不知道楼主做没做过MEF细胞的制作，这是个很残忍的试验。这个细胞取自老鼠胎儿，去掉手足头尾巴及内脏，磨碎以后进行贴壁培养，随着元代培养的结束血细胞应该死亡，所以个人认为细胞是个混合细胞，有可能包含神经细胞，表皮细胞，但是没有内脏细胞和脑组织细胞，主要成分可能还是纤维细胞。$ Y* N! \3 s; d# s* i, o- d
! c" ]0 M7 o- Z1 p: d6 |' X! u/ y
我也对这个细胞有疑问。据说这个细胞对nestin神经抗体呈阳性，不知道楼主是不是也看见这个结果了。请问这是什么原因呢？

作者: 白衣小彩 时间: 2010-6-30 16:05

实验用作饲养层制作的主要是成纤维细胞，主要选择12.5-14.5dpc鼠胚纯度较高，培养时肯定会一些杂细胞主要是上皮细胞，它分泌的细胞因子有助于ES/EG在体外保持未分化状态。

作者: wangzhuo822001 时间: 2010-6-30 16:19

开始有杂细胞，但是培养两代后应该就都是成纤维细胞了～～

作者: songzxj 时间: 2010-6-30 16:46

那有没有分析过，这种分离出的MEF中，成纤维的比例有多大呢？非成纤维的成分又是什么？

作者: xjya 时间: 2010-6-30 16:54

回复 5# songzxj
3 ?9 r* u' [6 g% F$ |/ B
( I1 ]9 d/ y2 a" Q% x: t
我做过MEF的染色,100%都是vimentin阳性细胞。当然，vimentin不是fibroblasts 的特异性抗体。

作者: xjya 时间: 2010-6-30 17:10

进一步看，MEF 100% a-actinin，sm-actinin和CD31染色均为阴性，说明应该不是内皮细胞或是肌细胞。另外从形态学看，MEF也可以与内皮细胞区别，前者呈长梭形，后者是鹅卵石样细胞。神经细胞我个人认为在MEF培养的条件不会存活。
另外公认的MEF原代培养是取12.5天左右的胚鼠，这个时间点应该是基于大量研究证实的获得MEF 的最佳点。

作者: 上海过客 时间: 2010-6-30 17:11

回复  songzxj
0 ^: R! T# J& }& ^3 S6 j: c# @' R3 [1 O/ C5 a- N, V9 v  [3 }

9 o8 g* E# F: u1 v  B* } 我做过MEF的染色,100%都是vimentin阳性细胞。当然，vimentin不是fibroblasts 的特 ...
. X# t" ?9 H9 E: qxjya 发表于 2010-6-30 16:54

( w! U1 v# B* g" u- |

谢谢传几代也是这样吗？ Vimentin 是间充质干细胞的 MARKER 吧？! W, p0 A! T: P. F- [

这个的确是非常令人迷惑。既然是间充质干细胞里面可能会存在多能干细胞。

作者: 上海过客 时间: 2010-6-30 17:18

回复上海过客 # J; I& b S- W g9 g! A
6 m' I5 ]+ a( H) ?9 V
MEF 是Mouse embryonic fibroblast的略称。
, s) q* o6 [/ P& I3 {, c7 e, b
. M0 B. O4 R% L! k4 l6 n不知道楼主做没做过MEF细胞的制作，这是 ...
" j: I9 x9 a6 g. w z- Qshewawa 发表于 2010-6-30 14:28

做胚胎干细胞的没有不做MEF 原代培养的吧。
l5 a+ v# t' m8 F5 U8 Y
我怀疑的问题就是 MEF 是不是均一的细胞，是不是有多能性的干细胞存在。
8 T4 |" }, D% _7 t/ I0 _
最近PNAS 有一篇文章似乎也提出这个问题了，间充质细胞里存在有多能干细胞。

作者: 上海过客 时间: 2010-6-30 17:19

以上结合我另一个帖子。可能 MEF PCR 扩增出来 OCT，NANOG，Sox2 是对的。
8 E+ v- `2 D- A0 x( J# K
扩增不出来反而是有问题的。

作者: marrowstem 时间: 2010-6-30 17:23

个人认为MEF里面存在干细胞的可能性不能排除。有实验证明成纤维细胞本身也具一定的多潜能性，在组织坏死时他会表现修复活性出来。

作者: cony 时间: 2010-6-30 20:11

有没有可能就是在取MEF的时候把somatic stem cell也取了点出来呢

作者: 绿雪 时间: 2010-6-30 20:41

我觉得这种可能性还是挺大的。

作者: zhenhua 时间: 2010-6-30 20:48

MEF分离自小鼠13.5d左右的胚胎，分离后可能混有其他细胞，但主要还是MEF。一般认为，传几代后就变得单一了。个人认为，MEF的评定标准是从形态上看的。

作者: lixiaodong 时间: 2010-6-30 21:42

学习了。

作者: marrowstem 时间: 2010-6-30 21:54

用形态来判断细胞类型是要犯错误的，而且有很多类型的细胞几乎无法根据形态来区分，这一点病理医生可能太有体会了，有好多的肿瘤，根据显微镜观察明明认为是哪一类型的组织肿瘤，但免疫组化结果出来却是另一组织来源的肿瘤。

作者: marrowstem 时间: 2010-6-30 22:00

如果有人能设计一个巧妙的实验来求证这个怀疑，也许是一个可以写进教科书的great work.打破沙锅问到底，有时也是有用的，可以开创一个领域，并不排除Nobel Price的可能。

作者: zsc78 时间: 2010-6-30 22:40

主要是成纤维细胞，在未处理前肯定存在很多干细胞，特别是前两代可以看到很多细胞形成类似ESCs的细胞团，经过处理后的MEF由于细胞都不能增殖了，也就不存在是不是干细胞的问题。当然不排除没有处理完全的可能。另外Vimentin理论上好像说是MSCs的标志之一，但好像在很多细胞都可以染出阳性来。

作者: 上海过客 时间: 2010-6-30 23:26

主要是成纤维细胞，在未处理前肯定存在很多干细胞，特别是前两代可以看到很多细胞形成类似ESCs的细胞团，经 ...
9 g8 Z8 i' q7 `zsc78 发表于 2010-6-30 22:40

- t( f9 [8 l4 I' _, P
; B A! K0 C% _6 w5 j
我就是对成纤维细胞这个提法感到怀疑。怎么可以用这种形态方法来描述细胞呢？肿瘤细胞里现在认为尚且存在肿瘤干细胞。

成纤维细胞是一种均一性的细胞吗？

作者: zsc78 时间: 2010-7-1 00:01

做为饲养层细胞本身就不应该是单一的细胞吧？在正常体内，每个细胞周围的细胞不应该是完全相同的。

作者: Weidan 时间: 2010-7-1 01:10

刚养了MEF原代，并传代，感觉非常好养，而且基本上细胞都是成纤维细胞吧，杂细胞很少，基本没有。不用太担心。

作者: xjya 时间: 2010-7-1 09:29

回复 8# 上海过客 1 r6 n8 [1 b/ h2 N1 M O. n
Vimentin不是fibroblast的特异性标志物，也不是间充质的特异性标志物

作者: xjya 时间: 2010-7-1 09:51

[attach]9983[/attach]
跟大家分享

作者: ambassador 时间: 2010-7-1 22:37

回复上海过客
* ^: q" P7 X) {7 _& z8 m8 p2 aVimentin不是fibroblast的特异性标志物，也不是间充质的特异性标志物
4 J" F; }" r( Txjya 发表于 2010-7-1 09:29

$ ~8 E/ F7 e* v6 E: a, t5 l
那Vimentin是什么细胞的特异性Marker？它不是波形蛋白嘛~存在于间充质来源细胞（如成纤维细胞）和体外培养的细胞中的一种中间纤丝蛋白（58kDa）.

作者: ambassador 时间: 2010-7-1 22:40

个人认为MEF里面存在干细胞的可能性不能排除。有实验证明成纤维细胞本身也具一定的多潜能性，在组织坏死时他 ...% C0 t2 E, G y4 }
marrowstem 发表于 2010-6-30 17:23

! q% _" x$ J. z \) a
+ E: o+ J: D, V/ U. l$ }* h8 M* t! }
& O+ i9 I. B! B5 i4 p8 Z( `& c
有原始文献为证吗？贴出来吧~

作者: xjya 时间: 2010-7-2 14:19

回复 24# ambassador : [% A% u0 o9 {+ [" k; R) I' h3 k

vimentin是fibroblast的标志物之一但不是特异性的.文献报道FSP1（Fibroblast-specific protein-1）应该是比较特异性的标志物。

作者: marrowstem 时间: 2010-7-5 20:09

回复 25# ambassador & G! S* d$ b6 @6 h. z" b* D4 ]
百度百科里就是如此介绍和定义成纤维细胞的。

作者: ambassador 时间: 2010-7-5 20:20

回复 ambassador ) M; z( y9 C' j9 G
百度百科里就是如此介绍和定义成纤维细胞的。# _ I4 e+ Z/ M! f) O; h5 b5 F
marrowstem 发表于 2010-7-5 20:09

' R0 S3 ^4 ]/ x1 `1 z

百度百科上的不专业，你所说的“有实验证明成纤维细胞本身也具一定的多潜能性，在组织坏死时他....”这句话的根据在哪里？作为斑竹，应该更加严谨！

作者: marrowstem 时间: 2010-7-5 20:42

成纤维细胞
1 |, O% ~0 B: |, f: h, r, u
中文名称：成纤维细胞
英文名称：fibroblast
定义：普遍存在于结缔组织中的一种中胚层来源的细胞。分泌前胶原、纤连蛋白和胶原酶等细胞外基质成分，伤口愈合过程中可迁移到伤口进行增殖。所属学科：细胞生物学(一级学科) ；总论(二级学科)
本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 - b. c( S: h" f7 s7 P; r
百科名片
疏松结缔组织中的成纤维细胞成纤维细胞（fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymal cell)分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。根据不同功能活动状态，可将细胞划分成成纤维细胞和纤维细胞，成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。& g" H* K' A$ s5 P% R# d6 D$ P
7 B; d. W8 A( X6 g8 k6 t
细胞的功能活动状态划分
来源9 m/ [, }" l5 g2 \% e1 V( s2 R; r
特征
创伤修复一般创伤修复
骨创伤修复7 P' b% F- ~$ U  O7 w
分离培养7 f. @4 o0 J  z/ @
原代培养酶消化法/组织块法1 J& Y. [, |: u8 x* e+ ]) D, F
示例) J# g. g2 ]  t0 R+ s- z
展望细胞的功能活动状态划分
来源
特征 7 L9 s. Y1 W7 i/ p6 {+ l
创伤修复一般创伤修复
骨创伤修复6 z% D$ x* \. f
分离培养
原代培养酶消化法/组织块法 , o9 @0 s; ^1 E$ O4 n. s) c0 l
示例
展望
; w$ V$ d# M2 V5 c- x& \. W4 ~8 X6 E
" I# w$ D: z7 P" g8 U
　　
细胞的功能活动状态划分: M/ O8 k& E$ G2 c  ~+ C5 O
　　根据不同的功能活动状态，将细胞分为成纤维细胞和纤维细胞二型：成纤维细胞乃是功能活动旺盛的细胞，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动；纤维细胞（fibrocyte）功能活动不活跃，细胞轮廓不明显，核小着色深，核仁不明显，细胞质少。此二型细胞可互相转化。[1]
来源$ I" {4 h+ b% A. u+ I6 l3 O# j
　　成纤维细胞：数目最多，胞体大，为多突的纺锤形或星形的扁平细胞，细胞核呈规则的卵圆形，细胞轮廓不清。　　成纤维细胞摄取所需的氨基酸，如脯氨酸和赖氨酸等，在粗面内质网的核蛋白体上合成前α多肽链（proalpha polypeptide chain），多肽链输送到高尔基复合体后，组成前胶原分子（procollagen）。前胶原分子由分泌囊泡带到细胞表面，然后通过胞吐作用释放到细胞外。在前胶原肽酶催化下，将每一前α多肽链的尾段除去，成为原胶原分子（tropocollagen）。许多原胶原分子成行平行排列，结合成具有周期性横纹的胶原原纤维。由胶原原纤维互相结合形成胶原纤维。
特征! m7 w* @6 w) _6 v
　　成纤维细胞是结缔组织中最常见的细胞，由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymal cell)分化而来。在结缔组织中，成纤维细胞还以其成熟状态—纤维细胞(fibrocyte)的形式存在，二者在一定条件下可以互相转变。不同类型的结缔组织含成纤维细胞的数量不同。通常，疏松结缔组织中成纤维细胞的数量比同样体积的致密结缔组织中所含成纤维细胞的数量要少，故分离培养成纤维细胞多以真皮等致密结缔组织为取材部位〔2，3〕。成纤维细胞形态多样，常见的有梭形、大多角形和扁平星形等，其形态尚可依细胞的功能变化及其附着处的物理性状不同而发生改变。成纤维细胞胞体较大，胞质弱嗜碱性，胞核较大呈椭圆形，染色质疏松着色浅，核仁明显。电镜下，其胞质可见丰富的粗面内质网、游离核糖体和发达的高尔基复合体，表明它具有合成和分泌蛋白质的功能。成纤维细胞尚可合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维及有机基质。它合成的前胶原蛋白分子经内切酶作用，聚合和重排，可形成与成骨细胞合成分泌的胶原原纤维一样具有64nm(640Å)周期横纹的胶原原纤维，胶原原纤维经互相粘合形成胶原纤维。经检测，这两种细胞合成分泌的胶原纤维均是Ⅰ型胶原纤维，在形态和生化结构上完全相同〔4,5〕。处于成熟期或称静止状态的成纤维细胞，胞体变小，呈长梭形，粗面内质网和高尔基复合体均不发达，被称为纤维细胞。在外伤等因素刺激下，部分纤维细胞可重新转变为幼稚的成纤维细胞，其功能活动也得以恢复，参与组织损伤后的修复。另外，在结缔组织中，仍保留着少量具有分化潜能的间充质细胞，它们在创伤修复等情况下可增殖分化为成纤维细胞。[2]% |4 e+ }9 e$ b0 l+ G/ Z
创伤修复
一般创伤修复
　　各种创伤均会造成不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损，必须通过细胞增生和细胞间基质的形成来进行组织修复。在此修复过程中，成纤维细胞起着十分重要的作用。以伤口愈合过程为例，成纤维细胞通过有丝分裂大量增殖，并从4～5天或6天开始合成和分泌大量的胶原纤维和基质成分，与新生毛细血管等共同形成肉芽组织，填补伤口组织缺损，为表皮细胞的覆盖创造条件。在伤口愈合中，成纤维细胞主要来源于真皮乳头层的局部成纤维细胞和未分化的间充质细胞，以及血管周围的成纤维细胞和周细胞。内脏损伤时，参与修复过程的成纤维细胞多来自间质和包膜，以及粘膜下或浆膜下层的结缔组织。有人认为创伤愈合过程中伤处聚集的大量成纤维细胞，一方面是由成纤维细胞通过分裂增殖而来，另一方面，更多地是由邻近的间充质细胞、纤维细胞和毛细血管周细胞等演变或游走到伤处。在创伤修复的后期，成纤维细胞通过分泌胶原酶参与修复后组织的改建。在某些病理条件下，以成纤维细胞为主要细胞成分的肉芽组织或增生组织块还可以在非骨组织内发生钙化，引起异位骨化(ectopic ossification)。但对于异位骨化的参与细胞及其机制尚不十分清楚，未分化间充质细胞、成纤维细胞、内皮细胞和毛细血管周细胞等可划归为诱导性骨祖细胞的细胞都有可能参与这一过程
骨创伤修复
　　最简单和常见的骨创伤即是骨折，其愈合过程须经过炎性反应、清扫、纤维骨痂和骨性骨痂4个阶段。不同阶段参与的细胞主体不同。成纤维细胞从骨折第3天起就出现于骨折局部血肿中，骨折后5天即在机化血肿及骨折断端的间隙及其周围大量存在，是参与纤维骨痂阶段的主要细胞成分。在此阶段成纤维细胞一方面大量分裂增殖，一方面又合成和分泌大量Ⅰ型胶原，使肉芽组织逐步变成疏松的结缔组织，将骨断端包围起来，形成接合两骨折断端的巨大的纤维骨痂。然而，这种由无数成纤维细胞和丰富的肉芽组织为主体构成的纤维结缔组织却不会演变为在其它组织创伤修复时常见的瘢痕组织，而是通过钙盐结晶在其内部不断沉积，逐渐演变为骨性骨痂，使骨折局部的修复达到骨性愈合，恢复骨组织的结构。此时，骨折愈合部只有骨组织而不再存在成纤维细胞。
分离培养5 [4 T; m  i& P0 T# T, |
　　成纤维细胞的分离培养一开始并不涉及成骨作用，而主要是用于研究细胞的老化、各种外来因子对细胞的损伤、细胞在体外条件下的恶性转化、以及某些先天性代谢异常、酶缺陷等。由于皮肤成纤维细胞易于获取，又易于在体外生长，故目前皮肤成纤维细胞培养已在基础医学和临床医学研究中得到较广泛的运用，其分离培养技术已相对成熟，对其体外生长规律也有了较全面的认识。
原代培养
酶消化法/组织块法; T' [. G5 a, m; W: I4 P3 Q
　　成纤维细胞的原代培养可用酶消化法或组织块法，其中组织块法又因其操作简便、条件易于控制而应用更为普遍。通常，以酶消化法获得的成纤维细胞悬液在接种后5～10min即可见细胞以伪足初期附着，与底物形成一些接触点；然后细胞逐渐呈放射状伸展，胞体的中心部分亦随之变扁平；最快者大约在接种后30min，细胞贴附底物即较为完全，呈现成纤维细胞的形态。采用组织块法则大约在接种后2～3天［2，3］到1周左右，在接种的皮肤组织块周围长出细胞。待细胞融合成片，铺满培养容器底壁大部分时即可进行传代。一般都采用胰蛋白酶(trypsin)，将成纤维细胞从底壁消化下来后分瓶作传代培养。成纤维细胞在体外培养条件下能保持良好的分裂增殖能力。细胞分裂时变为球形；分裂后又平铺在附着物的表面成为有突起的扁平细胞。体外培养的成纤维细胞，其生命期限与物种等因素有关。$ {" o" P/ f* K
示例5 g3 n" x. u7 n$ T1 Y: X
　　例如：人胚成纤维细胞约可培养50代；恒河猴皮肤成纤维细胞能传代超过40代；鸡胚成纤维细胞则只有少数能培养30代；而小鼠成纤维细胞多数只能生长8代左右。另外，从老年个体取得的成纤维细胞的寿命要比取自年轻者短。由于在细胞传代和进行体外培养时，细胞的生物学特性会逐渐发生一些不同于体内的改变，故通常只将前10代视这正常细胞，可在此时将生长旺盛的成纤维细胞冻存起来，以备将来复苏使用，这在将培养的细胞由动物实验向人体实验过渡的过程中必须给予足够的重视。
展望& l0 k. K" n/ X2 R. T3 M
　　尽管成纤维细胞受哪些因素诱导可以产生成骨作用、这些因素的诱导方式及其机制如何以及成纤维细胞在骨形成中是否分化为成骨细胞等等问题尚未完全解决，但成纤维细胞经诱导可以形成骨组织这一现象已逐渐为广大科学工作者所接受。由于成纤维细胞直接参与了骨折愈合过程中纤维性骨痂的形成，其自身又具备被诱导成骨的能力，可以设想，利用成纤维细胞分布广泛、取材方便、对机体损伤较小、体外培养容易成活、增生繁殖较快等较其它具有成骨作用的细胞(如骨膜成骨细胞、骨髓基质细胞等)优越之处，在体外大量培养扩增成纤维细胞，并施以有效的诱导因素(如上皮细胞、TNG-α和BMP等)使其具备成骨效能，然后与合适的生物材料载体复合，同时使该复合体在体外或体内保持良好的成骨能力并进行一定程度的成骨，则有望获得具有一定的生物力学支撑强度而成骨作用又保持活跃的“活骨”复合体，用以替代自体骨或异体骨回植体内治疗难以自身修复的较大的骨缺损，这无疑将为骨缺损的修复治疗开辟一条新的有辉煌前景的道路。在组织工程技术和生物材料科学已有较大发展的今天，这一设想是极有可能实现的。当然，从目前所处的实验阶段过渡到临床应用尚有很大一段距离，需要解决的问题还很多，而且随着研究的展开和深入，问题可能还会越来越多，但这确实是一项很有临床应用价值和社会、经济效益的重大课题，值得广大基础医学工作者和临床科研人员为之而努力。  v3 h+ e1 o9 ?; B. i. m

参考资料 % N2 `6 r$ m5 q/ s( X
1. 资料来源，百度知道& ~5 {( O# {$ d2 f4 M( o' R
+ p5 O" s* d; C1 M$ X) ?! Q. `
http://zhidao.baidu.com/question/98154562.html
2. 成纤维细胞的生物学特性及其成骨作用的研究进展
; \: d/ X9 I7 w1 M  \
http://www.douban.com/group/topic/2020525/
扩展阅读：
1.［1］温广明，徐达传.成骨细胞的成骨作用及复合移植研究进展.中国临床解剖学杂志，1999，17(4)：374 $ U6 o" u1 W0 k
/ n, i$ `6 y# }! {  o: E
2.　　［2］徐荣辉，饶寒敏，朱雅萍，等.皮肤成纤维细胞在体外培养中的成骨作用.中华外科杂志，1994，32(3)：190
0 Q. X' |9 n, W4 v  m1 W' e
3.　　［3］饶寒敏，徐荣辉，朱雅萍，等.家兔皮肤成纤维细胞在体外培养中的成骨作用(显微录象与四环素标记观察).中华骨科杂志，1995，15(5)：295

作者: marrowstem 时间: 2010-7-5 20:58

回复 28# ambassador
我想对成纤维细胞的这个定义的认识差不多是可以写入教科书的内容，难到还有必要怀疑。
另外不知你有没有注意细胞生物学教科书中有关细胞培养的一个知识点，对不同组织消化后的培养，能贴壁生长并被培养传代的细胞分为两种细胞（形态来分），大多数的是成纤维细胞，还有的是上皮样细胞。所以个人认为成纤维细胞其实是在哪种组织中都存在的，皮肤中的、肝组织中的、胃组织中的被分离出来的很有可能就是同一种类的成纤维细胞。
有时只是换了一身马甲而已。

作者: cortex 时间: 2010-7-6 10:45

个人觉得，MEF细胞成份应该来说不是很均匀，但是随着传代，应该是越来越单一了。至于里面有没有干细胞，我想做过MEF的人都应该知道，如果你一直往下传，能传到8代吧，至于想继续往下传，可就难罗，传不下去了，它就在那不增值了。是否有干细胞就需要自己去判断了。我个人觉得，只有做了实验，验证了的才能说明问题吧。

作者: cortex 时间: 2010-7-6 10:53

我所用的是ES培养基，如果存在干细胞，那只能说培养基的养分不够了。

作者: ambassador 时间: 2010-7-6 12:52

回复 ambassador
3 ]6 T% N! g% x2 d我想对成纤维细胞的这个定义的认识差不多是可以写入教科书的内容，难到还有必要怀疑。
+ U V' r$ q; ~ G8 v. A ...2 @: s: X, y5 j7 P6 U
marrowstem 发表于 2010-7-5 20:58

4 w$ Y# S, T$ E* r, ]" x8 q+ i5 p

对于百度上的定义有时还是需要慎重，这里只是想知道之前“有实验证明成纤维细胞本身也具一定的多潜能性，在组织坏死时他会表现修复活性出来。”这句话的出处！询问是否有文献佐证，以防“以讹传讹，误人不浅”。

作者: 随风的天使 时间: 2010-7-6 13:30

回复 9# 上海过客 0 q. G5 w: V: c' C( N% a* X

敢问大侠，可以提供一下PNAS的这篇文章吗？

作者: 上海过客 时间: 2010-7-6 15:45

回复上海过客
5 L, @0 A' E% P& {3 y6 e+ \& T/ `/ c6 [$ b3 ?
4 G$ n$ V, n# \( c/ g9 i6 {1 k
敢问大侠，可以提供一下PNAS的这篇文章吗？8 o! _+ }* h/ Q0 E% ~
随风的天使发表于 2010-7-6 13:30

4 O4 R- Z/ `) n$ _* k* O7 x
# X: q: r: ]& h) p

是这一篇文献
2 j- M+ L# b% Z* E, X8 h  u& u
/ K0 H  |- W5 S( Y  D
这里提到的间充质细胞  其实形态就是成纤维样的细胞。这些细胞如果做MEF原代培养的时候完全有可能被提出来。而且在大部分细胞不是干细胞的情况下，这些干细胞相当于培养在条件培养基中，维持原来的干性  是没有问题的。 0 N0 d0 w) C$ w
! {8 f% s$ F8 `3 U
; b( y) h* t- v, |0 W  a: J
这个只是我个人的看法。在这些问题上，我需要了解的东西很多。现在的认识相当的肤浅。       希望大家多讨论

作者: marrowstem 时间: 2010-7-6 18:17

回复 33# ambassador
   实话实说，我说的这句话就是出自于百度上的有关成纤维细胞的定义的相关内容的，可能在用词方面说的不是很到位，没有做到原话引用，有点断章取义，但我想意思还是没有超出成纤维细胞的角色作用的大范围。3 Y$ {( \- s3 m" p3 I
   我一直提倡对任何知识的吸收都争取做到——critical reserve,希望你对我的这句话也批判性的接受。而不要乱扣高帽子，说出这种“以讹传讹，误人不浅”的话来。这不是科学的争论，而是变成了攻击。; i7 S3 ^( x/ |' u% }+ E! D" T, C
   最后问你一个问题，你心目中的成纤维细胞又是一种什么概念的细胞？

作者: marrowstem 时间: 2010-7-6 18:28

再问一个问题：不同部位或不同组织中的成纤维细胞会是同一性质的细胞吗？如果有人宣称他重编程了皮肤中的成纤维细胞而获得iPS细胞，你会觉得这可以说是皮肤细胞被重编程了吗？我觉得这都是值得商讨的。
因为如果不同部位或不同组织中的成纤维细胞其实是同一性质的细胞，那么说皮肤细胞被重编程其实是混淆概念，个人认为皮肤细胞应该主要是指表皮的上皮细胞（角化细胞），如果硬要把成纤维细胞也要规划在内，那么皮肤细胞也要包括各种血液细胞、淋巴细胞、神经细胞和各种间质细胞等等各类人体所含的细胞（真皮内的各种组织细胞）。
个人意见，仅供参考。

作者: ambassador 时间: 2010-7-6 20:17

回复  ambassador
8 |. L8 N! P* O" v, K  B! Y" U    实话实说，我说的这句话就是出自于百度上的有关成纤维细胞的定义的相关内容的，可 ...
  L$ {' N" f9 b  ]$ p3 Xmarrowstem 发表于 2010-7-6 18:17

谢谢你的精彩评论，你举的这个例子也很好！个人以为成纤维细胞这个概念只是科学家为了区分与其他性质的细胞而定义的，至于其具体有没有干细胞的混合，只是传代时间的问题。个人知识浅薄，抱着学习和讨论的态度，怎敢有攻击的意思，言语有失，版主见谅。

作者: 细胞海洋 时间: 2010-7-6 20:23

大家讨论得很精彩如果互相之间言语有失都请不要在意再次感谢各位对干细胞之家的支持

作者: treestem 时间: 2010-7-6 21:47

回复 31# cortex
2 q# c$ f S1 n4 A* {+ M
3 C$ T0 Z# A- Z( m0 W
同意楼上的观点，的确，MEF传到第6代就有明显的形态变化，增殖速度也变慢，对于分离并不是很干净的成纤维细胞，在开始两代会有皮肤细胞和神经细胞，但之后在形态上就看不到这两种细胞了。对于MEF是否有干细胞，诱导的Ips是不是原有的干细胞而来，可以把不经诱导的MEF在同样干细胞培养条件下培养，看是否可以形成干细胞克隆。另外，可以对原始的MEF细胞进行分选，分选出的真正的成纤维细胞再进行诱导，这样应该可以排除假设的可能性。

作者: cortex 时间: 2010-7-6 22:15

回复 40# treestem

同意版主的看法。如果ips果真来源干细胞，不妨做一个对照实验，在相同培养基中培养，这样经过传代，分离纯化，也应该能够得到所谓的ips样细胞。

作者: 上海过客 时间: 2010-7-7 00:07

回复 treestem " i7 V! ?; J. Z7 M# D( L$ _

R1 T$ S! U( C' e7 [
4 l, G% ?4 x* U 同意版主的看法。如果ips果真来源干细胞，不妨做一个对照实验，在相同培养基中培 ...* p! ]$ R2 E9 t# ^2 w9 g" m
cortex 发表于 2010-7-6 22:15

* M& `3 W& T( Q7 y

这正是需要做的工作。用ES 培养基培养 MEF ，把那些聚集的团块挑出来。

是不是有可能得到多能干细胞呢？

作者: 上海过客 时间: 2010-7-7 00:11

个人觉得，MEF细胞成份应该来说不是很均匀，但是随着传代，应该是越来越单一了。至于里面有没有干细胞，我想 ...; k8 U$ F4 f% n. n1 L3 |2 q
cortex 发表于 2010-7-6 10:45

* v$ q* `4 Z+ l; L- F- V  `: F. j
/ |( C, S8 E. D+ u
1 为什么传代后  会单一  ？          分化了吗？8 M) U* O* t  n0 y' V
2  理论上说可以传8代。          但是加了VC 后可以多传几代是什么原因呢

我觉得这都是很有意思的  问题  啊。  VC 那篇文献是广州  做的  ，大家应该都知道吧

作者: followme 时间: 2010-7-19 10:57

学习啦

作者: ningtinglu 时间: 2011-6-16 20:28

回复上海过客的帖子 i# }6 x4 ?( C$ M

可以发一下广州vc那篇文献吗？谢谢

作者: ningtinglu 时间: 2011-6-16 21:08

回复上海过客的帖子" K- I1 H" Z$ P2 Q& {) e2 h0 p" N

这篇文章介绍了vc可以减少p53的表达量，缓解细胞的衰老。至于第一个问题，如果里面有干细胞肯定会分化的，单一只是形态上的，是不是全都一样的细胞目前好像毫不清楚

作者: ningtinglu 时间: 2011-6-16 21:08

打错字了是还不清楚

作者: bllx58 时间: 2011-6-18 10:14

MEF里不会是一种纯细胞，但随着代数的增加会变纯9 X1 D5 r3 k6 }8 w; `
& b2 R( {0 |3 q
最近的一篇文章有没有看过（附件中）  }3 `4 ]9 m9 U3 U: H* M# q
Multilineage-differentiating stress-enduring (Muse)
cells are a primary source of induced pluripotent: H% g8 h1 h: d  r
stem cells in human fibroblasts
Shohei Wakaoa,1, Masaaki Kitadaa,1, Yasumasa Kurodaa, Taeko Shigemotoa, Dai Matsusea, Hideo Akashia,
Yukihiro Tanimuraa, Kenichiro Tsuchiyamaa,b, Tomohiko Kikuchia, Makoto Godac, Tatsutoshi Nakahatad,8 I6 \, v6 \4 q$ o
Yoshinori Fujiyoshic, and Mari Dezawaa,24 O! J3 \5 x4 y% _4 H. v
Departments of aStem Cell Biology and Histology, and bDermatology, Tohoku University Graduate School of Medicine, Sendai, Miyagi 980-8575,$ }7 H7 D0 s8 X1 R8 A
Japan; cDepartment of Biophysics, Graduate School of Science, Kyoto Univerysity, Kyoto 606-8502, Japan; and dCenter for iPS Cell Research and Application,: |( h4 ?3 u7 [; G
Kyoto University, Kyoto 606-8501, Japan
Edited by Darwin J. Prockop, Texas A & M Health Science Center, Temple, TX, and approved May 4, 2011 (received for review January 19, 2011)
The stochastic and elite models have been proposed for the
mechanism of induced pluripotent stem (iPS) cell generation. In; |' u/ Y& ]0 `( R% S( j
this study we report a system that supports the elite model. We
previously identified multilineage-differentiating stress-enduring
(Muse) cells in human dermal fibroblasts that are characterized
by stress tolerance, expression of pluripotency markers, selfrenewal,
and the ability to differentiate into endodermal-, mesodermal-,
and ectodermal-lineage cells from a single cell. They can
be isolated as stage-specific embryonic antigen-3/CD105 doublepositive
cells. When human fibroblasts were separated into Muse* S" o& e# e" ?0 |' V+ w4 X
and non-Muse cells and transduced with Oct3/4, Sox2, Klf4, and1 ^4 ^# Y  Z3 C
c-Myc, iPS cells were generated exclusively from Muse cells but8 v3 f$ B* j2 g, Z9 I
not from non-Muse cells. Although some colonies were formed: S; v. f% }* `! V( d3 @4 z% k0 P3 c
from non-Muse cells, they were unlike iPS cells. Furthermore, epigenetic% l( ^# C) l! p
alterations were not seen, and some of the major pluripotency
markers were not expressed for the entire period during2 J) p) A" B! x: j4 m7 g% W
iPS cell generation. These findings were confirmed further using
cells transduced with a single polycistronic virus vector encoding0 T! U9 i5 j* Y
all four factors. The results demonstrate that in adult human fibroblasts
a subset of preexisting adult stem cells whose properties are' ^5 [8 P$ a& U; x9 O
similar in some respects to those of iPS cells selectively become iPS; i8 l( n9 f; n8 C
cells, but the remaining cells make no contribution to the generation* d- e# I% @$ A! V; S
of iPS cells. Therefore this system seems to fit the elite model+ G; ]$ ]! t0 t, F1 w) J! K+ }
rather than the stochastic model.6 Z9 z: e0 b) E$ Z/ y& K) Z3 Q

在原始Fibroblast中用特定Marker分离出一群细胞，只有该种细胞可以被诱导为iPS，基本可以回答你的问题吧，MEF中可见一斑[attach]28825[/attach]

作者: Crystal_B 时间: 2013-10-12 11:10

学习啦！

作者: syacr 时间: 2013-10-14 15:43

回复 xjya 的帖子, T3 ^6 l. \" v2 x0 p
7 y. b* D8 R2 Q* ]
请问您确定是12.5天吗？我是做iPS的，每次都取13.5天的MEF，会不会有问题？

作者: cyperus 时间: 2014-8-6 21:11

刚才做了这个实验，从鼠妈妈肚子里面取出13天的小鼠胚胎，去掉头和四肢然后拿尾巴做基因型鉴定....0 x. s6 ?( R, p5 p; O/ O
好可怜，这些实验用小鼠。

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