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标题: 养HMSCs的一些问题 [打印本页]

作者: youyou0795 时间: 2010-7-13 16:01 标题: 养HMSCs的一些问题

周末去医院拿几瓶HMSCs来做实验，不过以前养的都是细胞株，第一次养干细胞，有几个问题想向众位高人请教一下：1 O# k$ O. v0 m0 J
1，我们的培养基一直都是高糖的DMEM+10%FBS，HMSCs必须用低糖的DMEM么？$ y w+ X1 H7 q9 [% m. V
2，养HMSCs培养瓶要额外处理么？我们以前用的都是Corning的塑料培养瓶
3，HMSCs可以冻存么/?和普通的细胞株冻存有啥不一样么？
4，如何检测HMSCs是否分化了？" G; \/ W) W7 S& O- S# \; M( H" O) j
谢谢各位大虾啦

作者: lukerende 时间: 2010-7-13 17:03

1我用的是IMEM  10%胎牛; v: K% m3 \) w4 d
2瓶子没有额外处理  和以前养肿瘤的一样的瓶子. r4 `, K) L1 R& j' X; `# R" M2 f
3当然可以冻存了啊没有区别 3 v$ u8 w* O/ J* W3 P: o) s! h
4看形态或者是做流式细胞实验
个人观点  该细胞很难养的尤其是消化传代的时候消化时间和吹打的问题消化时间长了吧会使细胞衰老养的细胞老化短了吧接下来吹打很难进行  再说说吹打的问题吹打的不用力吧很难下来用力吧会产生细胞碎片很矛盾啊我到现在还没有掌握敲门

作者: lukerende 时间: 2010-7-13 17:06 标题: MSC细胞消化问题

该细胞很难养尤其是消化传代的时候消化时间和吹打的问题消化时间长了吧会使细胞衰老养的细胞老化短了吧接下来吹打很难进行再说说吹打的问题吹打的不用力吧很难下来用力吧会产生细胞碎片很矛盾啊我到现在还没有掌握敲门也没有人养的好的分享一下您的详细过程推动干细胞事业的发展

作者: youyou0795 时间: 2010-7-13 20:42

谢谢大侠，' ]7 w6 N/ a" L5 C/ A/ V' V( S# N
我听我老师讲消化的时候放到培养箱里30s，然后拿出来吹打，她说她们在美国都是这么养的，经供参考~~. W. y# ~# b* m$ H9 T% k# @3 l+ @5 }
& f: f/ e: g( ?. n/ q
回复 3# lukerende

作者: lukerende 时间: 2010-7-14 09:00

你自己实验看就知道了我也是在培养箱里面消化的可拿出来吹打的时候很难吹打下来的方便你去问问你们老师具体的过程吗就是说消化你们是要离心消化还是直接把胰酶倒掉 420852735 我的QQ

作者: why121 时间: 2010-8-11 23:35

我用的是脐带血源的培养基是买的stemcell公司的专用培养基，现在刚做了原代也很关注纯化的问题，有文献报道是3-5分钟但没实际用过希望有这方面经验的不吝指教~谢谢。关于楼主的问题 MSC有个特性就是贴塑料瓶子应该是可以的但有文献报道用FBS包被过会好些具体没这样做冻存是没问题的干细胞嘛 --自我更新和分化潜能的嘛（个人愚见）

作者: nana0212 时间: 2010-8-13 13:26

对于消化，我做过的是37℃培养箱2min，那出来镜下看已经基本都下来了，再加培养基终止胰酶，然后轻轻吹打下。再移到离心管里离心去弃液。书上也差不多这么说的。
新人愚见~

作者: 宥宥自得 时间: 2010-9-2 15:32

我在消化过程中也发现比较难细化下来，而且传代后死掉的细胞比较多。有谁有好的方法吗？或是应该注意问题，请指教。谢谢啦1

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