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标题: 重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？ [打印本页]
作者: 上海过客    时间: 2010-7-14 15:28     标题: 重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？

重读 山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？/ T+ F# b, `% a# k

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( C; d* h) l. P: R4 V0 g4 y既然证实了  转入四个基因 以后 会发生重编程，那么没有转入的细胞是不能编程的。; x: @, O# J7 L

6 Z* G; E% P' ^# m3 A, W& GiPS 都被转入了四个因子吗 ？   
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! M6 E- A8 C9 z- I) c8 p; Z+ O现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？/ v( B' `6 `: s

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  H0 z* `- t# w( J& s或者干脆用  ES培养基来 养 MEF细胞 ，养14天 ，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？
作者: marrowstem    时间: 2010-7-14 18:01

Good question  and  try to do it.
作者: baixueyao029    时间: 2010-7-14 23:57

想法不错，你可以试一试
作者: wangming    时间: 2010-7-15 22:04

小分子物质诱导也是同样。
作者: 双刀    时间: 2010-7-16 10:51

楼主，请问你说的“现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果是空载的病毒载体应该是不会诱发重编程的。ES培养基直接培养应该也不会得到iPS，因为ES培养基中的成分并没有诱导重编程发生的能力。个人见解，如有错误，请指正
作者: 上海过客    时间: 2010-7-16 12:30

楼主，请问你说的“现在不是说 直接用病毒转染也可以 得到 iPS细胞吗 ？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果 ...- j+ O, m- i% }# N& o
双刀 发表于 2010-7-16 10:51
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4 C5 |6 M' N: Q9 e3 E新闻版里去找线索 吧 。, u" j; i0 T/ n3 ~* j, F5 D% {+ c% L
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MEF 里 就一定 没有多能干细胞吗？  为什么非要重编程呢？如果本来就存在多能干细胞呢？     你怎么排除 这个阴性对照的问题呢？ 用什么方法呢 ？; Y& G" a7 u5 p( X5 x- t0 \
诱导过程中出现的克隆就一定是  重编程的细胞吗 ？你 说是，那你用什么证明你的 细胞是经过重编程的 呢 ？9 S/ i& V! M4 C. ]  T8 x
) O; ^: j2 i/ u& x; L. b
我想起来一个科学笑话。
+ S: j: d1 V5 j" u! |1 ~% A' v$ Q: f& e- D+ Q
一个科学家说 ：我发现了一个非常有意思的 现象 * o6 U- K; _/ N1 z& i. L5 w2 ?7 }
  我做了一个实验： 我对跳蚤说跳，它就跳了起来。  然后我把跳蚤的腿都弄断了以后呢 。  我再 说跳 ，跳蚤置若罔闻 了 。所以结论就是： 跳蚤 腿没了以后就变成了聋子  。
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" l0 }5 e6 @8 H9 f所以我认为 山中这个SOUTHERN没有做 是绝对的失误  。我觉得经费问题应该也解释不了这个问题 。 毕竟他 150种敲除小鼠都做了 ，  做个 SOUTHERN 是没有什么难度。) a+ C3 ]* q( w* ?8 e8 B) Q
     SOUTHERN  是唯一能证明 iPS细胞是 转入了四个基因的细胞。这个也只是必要条件，还不是 充分条件 。        
9 h3 u' o  P4 D" I+ r9 {" @
1 V3 a/ l. W1 O* R7 I4 b  N  他这篇文章的附录里列了外源基因的  PCR引物，但是目前没看见  PCR结果 。 看过的同学   请  指出  。谢谢。
作者: amazingt    时间: 2010-7-16 19:05

"干脆用  ES培养基来 养 MEF细胞 ，养14天 ，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？"
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我做了这个，作为阴性对照。可是和双刀的猜测正好相反，有类iPS克隆出现。
作者: treestem    时间: 2010-7-16 20:41

回复 7# amazingt
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    可是，如果如你所说，任何因子诱导，都有可能出iPS克隆，但事实却不是这样，kamanaka的那篇文章及后来人的实践都是遵循这一规律啊
作者: marrowstem    时间: 2010-7-16 21:14

正如8楼所说的，我也有这点疑问，难道这些世界著名实验室的大牛能犯这么naive的错误吗？
作者: amazingt    时间: 2010-7-16 22:04

不知道事实是什么样子，至少在无重编程因子存在的情况下的确是可以产生类iPS克隆的。也不认为会犯什么naive的错误，我看高人刘有话说，虽然有些观点也不敢苟同。
作者: amazingt    时间: 2010-7-16 22:05

很困惑，纠结ing



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