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标题: 重读山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？ [打印本页]

作者: 上海过客 时间: 2010-7-14 15:28 标题: 重读山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？

重读山中的文献，再问问题，四个外源基因 Southern为什么没有做？

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既然证实了  转入四个基因以后会发生重编程，那么没有转入的细胞是不能编程的。
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iPS 都被转入了四个因子吗？    R' y4 ~: [# Y% _4 H! a7 @, W

5 N0 H8 F9 ]. O4 a
现在不是说直接用病毒转染也可以得到 iPS细胞吗？! j8 s- `5 I, n2 p8 ~8 \
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或者干脆用  ES培养基来养 MEF细胞，养14天，会是什么结果？  以前没有人这么做过吧  ？

作者: marrowstem 时间: 2010-7-14 18:01

Good question and try to do it.

作者: baixueyao029 时间: 2010-7-14 23:57

想法不错，你可以试一试

作者: wangming 时间: 2010-7-15 22:04

小分子物质诱导也是同样。

作者: 双刀 时间: 2010-7-16 10:51

楼主，请问你说的“现在不是说直接用病毒转染也可以得到 iPS细胞吗？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果是空载的病毒载体应该是不会诱发重编程的。ES培养基直接培养应该也不会得到iPS，因为ES培养基中的成分并没有诱导重编程发生的能力。个人见解，如有错误，请指正

作者: 上海过客 时间: 2010-7-16 12:30

楼主，请问你说的“现在不是说直接用病毒转染也可以得到 iPS细胞吗？”是指哪篇文献？谢谢！我认为，如果 ...& ]9 S, w, X* i
双刀发表于 2010-7-16 10:51

新闻版里去找线索吧。

MEF 里就一定没有多能干细胞吗？  为什么非要重编程呢？如果本来就存在多能干细胞呢？    你怎么排除这个阴性对照的问题呢？用什么方法呢？
诱导过程中出现的克隆就一定是  重编程的细胞吗？你说是，那你用什么证明你的细胞是经过重编程的呢？. E2 m% b- }/ h" e& F# k

我想起来一个科学笑话。
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一个科学家说：我发现了一个非常有意思的现象
  我做了一个实验：我对跳蚤说跳，它就跳了起来。  然后我把跳蚤的腿都弄断了以后呢。  我再说跳，跳蚤置若罔闻了。所以结论就是：跳蚤腿没了以后就变成了聋子  。
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所以我认为山中这个SOUTHERN没有做是绝对的失误  。我觉得经费问题应该也解释不了这个问题。毕竟他 150种敲除小鼠都做了，  做个 SOUTHERN 是没有什么难度。
   SOUTHERN  是唯一能证明 iPS细胞是转入了四个基因的细胞。这个也只是必要条件，还不是充分条件。

  他这篇文章的附录里列了外源基因的  PCR引物，但是目前没看见  PCR结果。看过的同学请  指出  。谢谢。

作者: amazingt 时间: 2010-7-16 19:05

"干脆用 ES培养基来养 MEF细胞，养14天，会是什么结果？以前没有人这么做过吧？"

我做了这个，作为阴性对照。可是和双刀的猜测正好相反，有类iPS克隆出现。

作者: treestem 时间: 2010-7-16 20:41

回复 7# amazingt , P: j: S5 j5 b$ e: G

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可是，如果如你所说，任何因子诱导，都有可能出iPS克隆，但事实却不是这样，kamanaka的那篇文章及后来人的实践都是遵循这一规律啊

作者: marrowstem 时间: 2010-7-16 21:14

正如8楼所说的，我也有这点疑问，难道这些世界著名实验室的大牛能犯这么naive的错误吗？

作者: amazingt 时间: 2010-7-16 22:04

不知道事实是什么样子，至少在无重编程因子存在的情况下的确是可以产生类iPS克隆的。也不认为会犯什么naive的错误，我看高人刘有话说，虽然有些观点也不敢苟同。

作者: amazingt 时间: 2010-7-16 22:05

很困惑，纠结ing

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