干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 为什么D3的MTT试验，使用DMSO配制的两种药不显示浓度梯度呢？ [打印本页]

作者: mominglily 时间: 2010-7-18 11:46 标题: 为什么D3的MTT试验，使用DMSO配制的两种药不显示浓度梯度呢？

本人做的D3的MTT试验，包含了四种药物：青霉素、5-FU、苯妥英和尼美舒利。前两者是水溶性药物，后两者是水不溶性药物，因此，后两者用DMSO先溶解，之后取含相同DMSO量的母液分别补足培养基使之成为各相应浓度梯度的受试药液，保证每个浓度梯度之后所含有的DMSO的量都一样，且DMSO的量很少（一般是取200微升用DMSO溶解的母药液加入到9.8毫升的培养基中，之后加样时每孔200微升含药培养基中的DMSO浓度几乎微乎其微，所以DMSO对D3细胞的损伤应该极小，且就算有损伤也保证了每孔的损伤完全相同）。我前三次试验没问题，虽然数据不理想，但都能做到显示颜色梯度。从第四次试验开始发现，除了零孔之外（零孔的OD值也比以前三次的值至少减低一半），其余给药孔几乎全无颜色梯度显示，几乎白板。后来重做一次发现连零孔的的值都是白板了。之后，就找不同的原因，也降低了药物的受试浓度很多倍了，还是没有颜色梯度。但是水溶性的那两种药都没问题，而且线性良好。而同时还做了3T3细胞的MTT也是同样的四种药，3T3细胞也没有问题，四种药都能出来颜色梯度。
这个问题一直困扰我到现在，还是没有解决，不知道什么原因，有乃位高手不吝赐教，小M不胜感激啊！

作者: mominglily 时间: 2010-8-4 23:28

希望各位大侠帮帮忙啊！~

作者: huanmiao2005 时间: 2010-11-21 22:19

请问楼主 D3做MTT时需要铺MEF吗
怎么消除饲养层的影响呢

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)