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标题: 关于电泳的一个问题(电压大小的使用) [打印本页]

作者: heiguzi1988    时间: 2010-7-19 22:35     标题: 关于电泳的一个问题(电压大小的使用)

电压越大,条带越不清晰。但是电压应该也不能太小吧。1 g' @) G% }; K9 y6 w
有谁可告知一下,琼脂糖凝胶电泳中不同区段的大小DNA片段用多大的电压么?(就是?V/cm)
作者: 上海过客    时间: 2010-7-20 08:10

这个就像  赛跑,你 就那么长的跑道  ,  几分钟跑完了 ,第一名 和最后一名差别就不大了。, ?* m4 D% @, V" L
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慢跑的话 ,就能分开了。
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最佳的电泳电压  都有 文献 的 ,去分子克隆里面找吧 。 这里 估计没有。 要么到  生命科学论坛里去看看
作者: ambassador    时间: 2010-7-20 08:51

电泳时电压不应该超过5 v/cm,注意此处的距离指的是正负电极之间的距离,而不是凝胶的长度!通过测量,我们是用的电泳槽正负极距离大概是27cm(谢谢黄菲同学提供直尺),故电泳电压宜《27*5=135V(对于PCR产物来说,更应该低于这一数值,110~120V就行了)。平时我们用的170~180V都是太高了。
& {" A2 `! j5 r8 [  k( z$ {) F( o# p/ v) d! [' a( D
电泳温度应该低于30℃,对于巨大的DNA电泳,温度应该低于15℃(所以电泳房工作状态下必须开空调!)。
5 `; U; v' P2 I. Z& ~  e注意如果电泳时电压和温度过高,可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段(我们muc13的PCR片段大小应该在300bp左右,更应注意)跑出胶而出现缺带现象!
作者: 淡定    时间: 2010-7-20 09:22

我们实验室一般是固定的电压100-103V,40mA,只是根据不同的片段长度配制不同的凝胶浓度,0.3%对应5-60kb,0.6%对应1-20kb,0.9%对应0.5-7kb,1.2%对应0.4-6kb,1.5%对应0.2-3kb。就这几个,仅供参考!
作者: guosapphire    时间: 2010-7-20 10:06

上面同学说的很好。我觉得你应该根据自己需要的活动的DNA大小来决定,同时也要考虑到配的胶浓度。建议不要使用>150V电压, 大片段可以考虑使用低浓度胶或延长跑胶时间来获得。
作者: meilin0118    时间: 2010-7-20 11:36

电压太大能把胶弄溶化了。我们实验室用120V电压。藤椅说的好好啊!
作者: hndxws    时间: 2010-7-20 22:08

DNA片段的大小与所需的电压没有关系,要用多少的电压与电泳槽两个电极的距离有关,理论上电压不应该超过5 v/cm,电泳的电压就是正负电极的距离*5v。但是好像超过了也没关系,但是也不能太大,还是在5v/cm以下好点。跑电泳的过程同时也是样品扩散的过程,电压太小,扩散就会多点,条带也不清晰。
; ^, S) T" R4 h$ t! _, J6 }区分不同大小的片段取决于胶的浓度。
作者: zhenhua    时间: 2010-7-21 10:58

学习了
作者: 102795mimi    时间: 2010-7-23 10:51

学习了,谢谢




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