干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 关于电泳的一个问题（电压大小的使用） [打印本页]

作者: heiguzi1988 时间: 2010-7-19 22:35 标题: 关于电泳的一个问题（电压大小的使用）

电压越大，条带越不清晰。但是电压应该也不能太小吧。
有谁可告知一下，琼脂糖凝胶电泳中不同区段的大小DNA片段用多大的电压么？（就是？V/cm）

作者: 上海过客 时间: 2010-7-20 08:10

这个就像  赛跑，你就那么长的跑道  ，  几分钟跑完了，第一名和最后一名差别就不大了。* ]. i1 L# Q8 D& L
' `. ^3 T. a  |' c
慢跑的话，就能分开了。

最佳的电泳电压  都有文献的，去分子克隆里面找吧。这里估计没有。要么到  生命科学论坛里去看看

作者: ambassador 时间: 2010-7-20 08:51

电泳时电压不应该超过5 v／cm，注意此处的距离指的是正负电极之间的距离，而不是凝胶的长度！通过测量，我们是用的电泳槽正负极距离大概是27cm（谢谢黄菲同学提供直尺），故电泳电压宜《27*5=135V（对于PCR产物来说，更应该低于这一数值，110~120V就行了）。平时我们用的170~180V都是太高了。% |6 }* N+ m4 t% }

电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA电泳，温度应该低于15℃（所以电泳房工作状态下必须开空调！）。
注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段（我们muc13的PCR片段大小应该在300bp左右，更应注意）跑出胶而出现缺带现象！

作者: 淡定 时间: 2010-7-20 09:22

我们实验室一般是固定的电压100-103V，40mA，只是根据不同的片段长度配制不同的凝胶浓度，0.3%对应5-60kb,0.6%对应1-20kb，0.9%对应0.5-7kb，1.2%对应0.4-6kb，1.5%对应0.2-3kb。就这几个，仅供参考！

作者: guosapphire 时间: 2010-7-20 10:06

上面同学说的很好。我觉得你应该根据自己需要的活动的DNA大小来决定，同时也要考虑到配的胶浓度。建议不要使用>150V电压，大片段可以考虑使用低浓度胶或延长跑胶时间来获得。

作者: meilin0118 时间: 2010-7-20 11:36

电压太大能把胶弄溶化了。我们实验室用120V电压。藤椅说的好好啊！

作者: hndxws 时间: 2010-7-20 22:08

DNA片段的大小与所需的电压没有关系，要用多少的电压与电泳槽两个电极的距离有关，理论上电压不应该超过5 v／cm，电泳的电压就是正负电极的距离*5v。但是好像超过了也没关系，但是也不能太大，还是在5v/cm以下好点。跑电泳的过程同时也是样品扩散的过程，电压太小，扩散就会多点，条带也不清晰。
区分不同大小的片段取决于胶的浓度。

作者: zhenhua 时间: 2010-7-21 10:58

学习了

作者: 102795mimi 时间: 2010-7-23 10:51

学习了，谢谢

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)