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标题: 骨髓间充质干细胞的培养 [打印本页]

作者: Sophia 时间: 2010-7-20 12:11 标题: 骨髓间充质干细胞的培养

请教一下，我最近两次养的骨髓间充质干细胞总是不贴壁，贴壁的非常少，这可能是什么原因呢？谢谢！

作者: 细胞海洋 时间: 2010-7-20 13:28

上传图片最好有方法步骤大家才能帮助你找问题原因

作者: tingwuyu 时间: 2010-7-20 14:45

就是了，这样子让人怎么解答

作者: 贝西高原 时间: 2010-8-5 21:16

检查一下操作程序

作者: Sophia 时间: 2010-8-5 22:19

[attach]11840[/attach]' g) Z, m% B1 d" ^" Q5 P& {1 |/ U) F4 Z
这是照片，请大家帮忙看一看，这是什么问题呀？
谢谢！

作者: mojai 时间: 2010-8-5 23:02

不是不贴壁，上面的亮圆点有可能是造血干细胞，骨髓间充质干细胞不纯，建议采用贴壁时间差法换液洗去杂细胞。
看照片上贴壁的细胞状态也不是很好，建议原代接种的细胞密度高一些，因为你种的细胞中还含有大量的杂细胞
还有你试验的步骤、试剂都没有，不好从这些方面分析，总之，细胞状态是由综合的因素决定的

作者: 大海 时间: 2010-8-5 23:59

有些因素会影响贴壁的比如你用肝素抗凝如果肝素浓度太高就会影响贴壁一般24小时后就可以首次换液了换液除去不贴壁的血细胞也有3-5天首次换液的看自己的情况决定首次换液的时间看你的细胞如果是首次换液后的情况应该贴壁的细胞挺多的因为细胞增殖很快一两天就要传代一次

作者: Sophia 时间: 2010-8-6 00:01

实验步骤：2只2周SD鼠，脱颈处死，酒精中浸泡5分钟，PBS冲洗，分离股骨、胫骨，5ml注射器吸取DMEM培养液冲出骨髓，800转离心5分钟，接种到两瓶75mm培养瓶中，48小时首次换液。换液后，观察贴壁的细胞很少，而且，之后的数天内，细胞状态越来越差，且生长很慢，这可能是什么原因呢？

作者: Sophia 时间: 2010-8-6 00:03

上述图片是原代3天的照片

作者: 大海 时间: 2010-8-6 16:54

如果是原代第三天的照片那么细胞说明贴壁的还不少如果正常情况下再换一次液除去不贴壁的细胞再过一两天就会长满就可以传代了而且你用的培养基血清的浓度及血清的质量都会影响你的细胞的生长的一般来说含10%-15%血清的培养基就可以如果血清浓度再高会引起细胞分化的

作者: susannajoke 时间: 2010-8-6 17:33

可能是【培养基的问题，我的脂肪干细胞也遇到这样问题，换了三种培养基就长得好了

作者: why121 时间: 2010-8-7 23:57

想请教下差速贴壁法的细节是什么大概时间是多久呢先贴的是MSC吗？还是巨噬细胞和成纤维细胞呢？有没有详细的步骤啊？请指点。如何从原代到纯化的传代

作者: csddyx 时间: 2011-1-28 22:50

作者: 916love 时间: 2011-2-16 14:51

回复大海的帖子

请教具体首次换液时间的利弊

作者: 916love 时间: 2011-2-16 14:52

回复 Sophia 的帖子
: C9 ]* D* q) j) C o! K3 V
污染了

作者: 大海 时间: 2011-2-16 22:43

回复 916love 的帖子7 C% A/ {, _; i! \! B# y- ~2 l
! O/ `2 L- I2 R; d9 I* F9 M
看情况而定一般三天换液就可以但是你取的组织很少的话可以晚点也可以有报道五天六天换液都可以

作者: lkzjyx 时间: 2011-6-7 00:54

骨髓间充质细胞在原代是是成集落生长的细胞生长比较缓慢上面看到的一些亮细胞可以是死细胞啦，但是要看到底是不是悬浮起来的，如果是的话那肯定就是死细胞了，可以通过换液去除，然后你可以等10天左右集落细胞比较多的时候按1：1传代，如果细胞还是贴壁不好或者是生长缓慢就有可能是血清不好或者浓度的原因了，你可以换进口血清，不行的话浓度20%，应该不会再出现你现在这种情况了

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