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标题: 请教 :关于干细胞成球实验中的换液问题和干细胞球的消化问题 [打印本页]

作者: 火云豹 时间: 2010-7-27 08:29 标题: 请教 :关于干细胞成球实验中的换液问题和干细胞球的消化问题

在干细胞成球过程中要对细胞进行半量换液文献上说的是每隔3天左右但是个人实验经验是一周左右换液也是可以的  我的细胞浓度时1x104/ml ' J0 e8 e) R2 r" M# s; F1 K1 {% J
  请教大家的问题是如何在换液的时候减少细胞球的丢失率我是用一毫升枪头尖端在培养皿中吸取上层液体总是感觉这样会丢失细胞球但有没有找到更好的办法不知大家有没有什么窍门呢+ d. D- A( A# F6 q1 y" H" ]$ j6 }, V

另外我在消化球把其变成单悬液不的时候是直接吹打的效果不佳上次好像听说有一个什么酶效果好  不知哪位战友有用的叫什么名字

作者: daviddow 时间: 2010-7-27 08:39

我是每次在原液上加上一些培养液，3天加一次。1 h' a! r) ?0 \: v3 N1 k' y, d T
胰酶，0.25%

作者: jixiaoqing 时间: 2010-7-27 09:09

我是用离心的胰酶消化

作者: 火云豹 时间: 2010-7-27 12:34

如果用胰酶消化的话有可能会损伤细胞膜表面的蛋白啊好像有比它更好的消化办法正在查找资料找到了和大家共享

作者: 火云豹 时间: 2010-7-27 12:35

还有你一旦离心的话肯定要吹打重悬这样不是很容易把球又给破坏了吗

作者: norther817 时间: 2010-7-27 20:59

很有意思的问题！# J2 V- b; ]' [. w1 k" ~

这是一个设计到干细胞球换液和传代的问题。; ^5 \4 r8 B8 s0 i. e

先说干细胞球：不同细胞来源的干细胞球其形成球的速度、大小和致密程度是不一样的。即可分为紧密球和疏松球。疏松球球内细胞结合松散，吹打即可使之分散。所以单纯换液，建议根据生长速度，3-4天添加新鲜培养基即可，根据球大小传代，一般球直径不宜超过200um。对于紧密球，吹打往往是无效的。换液方法可以直接加液也可以离心换液。同样紧密球直径也不宜太大，建议150um时传代。方法1：离心后胰酶消化+吹打。火兄分析的对，胰酶消化细胞膜表面的蛋白是有影响的，所以分析前尽量勿用。另外提到的另一个酶是Accutase，挺好的。 # m9 s7 b+ O3 q+ |
方法2：机械分割。将细胞悬液经细胞滤器滤过同时分割球。我们基本采用这种办法。4 w. w; [" U, U# x# F5 c6 m
相信以上方法对各位可行有益。

作者: 火云豹 时间: 2010-7-28 10:47

目前已经订购Accutase 400多元 100毫升是invitro的

作者: 下雪了 时间: 2011-5-11 12:22

请问这种酶有什么好处呢？不会对细胞有损伤么？谢谢~~

作者: shy1223 时间: 2011-7-19 11:19

为什么没有下文了？计算干细胞成球率具体方法是怎样的？是怎么计数的？用什么办法鉴定我的细胞就是干细胞呢？成球的细胞传代是直接把球挑出来还是一起传？传几代后细胞会不会变性了呀？

作者: shy1223 时间: 2011-7-19 11:19

回复火云豹的帖子! F( T; y) D, {1 t7 F, ^; c

为什么没有下文了？计算干细胞成球率具体方法是怎样的？是怎么计数的？用什么办法鉴定我的细胞就是干细胞呢？成球的细胞传代是直接把球挑出来还是一起传？传几代后细胞会不会变性了呀？

作者: leisong12 时间: 2011-7-20 17:38

培养瓶立起来静置10分钟，吸去部分上清，添加新鲜培养基即可。用Accutase消化即可，具体见附件说明。[attach]30612[/attach][attach]30612[/attach][attach]30612[/attach][attach]30612[/attach]

作者: xinxinyua 时间: 2012-4-15 21:11

多些，受益匪浅！

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