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标题: 求助：小鼠卵母细胞超排的资料以及操作流程 [打印本页]
作者: hcluo    时间: 2010-7-28 22:28     标题: 求助：小鼠卵母细胞超排的资料以及操作流程

哪位高人有小鼠卵母细胞超排的资料以及操作流程，里面最好包含各种试剂的含量，以及注射的剂量和时间（PMSG  HCG），取卵母细胞的部位和方法等等。十分感谢啊，等着急用。
作者: 张也行    时间: 2010-7-28 22:47

这个我没亲手做过，但是在小鼠胚胎操作手册上看过。下载地址：http://www.stemcell8.cn/viewthre ... hlight=%D0%A1%CA%F3
, g5 c- L; H0 K: h, Y里面说的很详细。
作者: hcluo    时间: 2010-7-29 16:37

我没法下载 （PDF电子书：小鼠胚胎操作实验手册）里面的东西，你能提供资源吗，十分感谢了！
作者: ailuomansi    时间: 2010-7-29 22:06

第一天   小鼠腹腔注射  PMSG 5-10IU/只（配比好的液体为0.1ml/只）
% b2 a! R2 z' R2 J/ I0 p: O第三天   腹腔注射hCG   5-10IU/只. J" ]' i. D; D9 J" F/ [& p
随之合拢（或种公鼠或结扎公鼠或不合拢取MII期oocyte）
' u, \$ N$ m. L) j; V# f0 j4 O第四天 早上 检查阴道栓（见栓当天可视为0.5天）（1cell 原核胚）取卵在输卵管壶腹部 撕破壶腹部，释放合子
$ f: Z  {' h0 k+ u8 T第五天  1.5天
/ q4 r& \1 e7 h& X* F2 w% Z5 Z2 z第六天  2.5天 (morula)  取卵 在输卵管和子宫  冲卵$ q" D: Y3 B: l4 B7 F
第七天  3.5天（blastocyst）取卵在子宫        冲卵
% A5 I1 ]$ |  e注射时间要按照小鼠光照周期来判定。
作者: healthlicn    时间: 2010-7-31 11:03

我补充一下，在注射hCG12-16小时后，可取出卵巢，用机械法或酶解法或两者结合的方法取出卵子，再在CZB等培养基中体外培养至GV期，再体外受精。
作者: qgjin    时间: 2010-8-3 16:46

楼上， 牛人！
作者: 懵懂干细胞    时间: 2010-8-10 20:27

小鼠解剖图.pdf (1.54 MB) 7 d4 b5 r$ a$ m, \) F/ \
我实验小鼠是昆明白。地理位置不同的话，时间差也是存在的。我把我的方法介绍给你吧，另外也给你个小鼠解剖图。
6 P: \4 ^  j% t% H3 e8 Y 下午2:30左右注射PMSG，我们使用了100个单位
# Z( R( b4 T  A. f/ Y! z3 r 48小时后注射人绒毛膜促性腺激素（HCG）
# J! ]/ `% s2 Z0 i- S 次日上午8:30左右观察母鼠阴道栓出现情况。出现阴道栓的记为孕0.5天$ B. D3 @4 ]. Q
取孕3.5天的母鼠，脱颈椎处死，浸泡于75%乙醇中消毒。, Z, R5 n) L, }) K. G/ Z
从酒精中取出已消毒的母鼠，剪开腹腔，充分暴露子宫及输卵管、卵巢。% R0 O3 ?/ ^# i
仔细分离子宫系膜，尽量去除子宫系膜及粘附在子宫及输卵管上的脂肪及系膜组织。 ) y' u7 s: V4 ~6 y% l
镊住子宫端，剪下输卵管近卵巢端。1 A1 _  G: k1 p) N3 U
剪断输卵管近子宫端，部分保留子宫。
, F1 Q( w# r5 O/ d$ C  Z! | 在无菌滤纸上吸干血迹，置入无菌培养皿内。
3 x9 S4 s7 |0 ?# L 用1ml无菌注射器吸入冲卵液，从子宫角端进针，保证针头进入子宫腔内，将冲胚液快速推入子宫腔。每侧子宫注入冲胚液0.2-0.5ml，冲胚液能将胚胎冲出。
  J$ K$ q$ c& q 事先制备好吸卵针：将毛细吸管在火焰上拉细，并用砂轮断末端，制备吸卵针。
5 i7 A4 n% V3 z% V 将盛有胚胎和冲卵液的培养皿置于50-100倍的解剖显微镜下，用吸卵针收集胚胎。3.5d胚胎一般处于囊胚期，但也可能处于桑葚期，均可使用。$ Q; V6 g( a$ o" }
选取形态饱满，发育良好的囊胚，用吸卵针吸取，放入预平衡的昆明白小鼠囊胚培养液中，放入37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养。

附件: 小鼠解剖图.pdf (2010-8-10 20:27, 1.54 MB) / 下载次数 26
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MTIwMDJ8OGZkYjdiZTF8MTc2ODU4MDUxNnww
作者: hcluo    时间: 2010-8-11 17:03

谢谢了，很详细啊。



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