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标题: 关于细胞铺板的小问题 [打印本页]

作者: hljzyydx 时间: 2010-8-3 13:07 标题: 关于细胞铺板的小问题

小弟以前没有铺过48孔板，这几天才开始，铺板后发现细胞有很多聚集在中间部分，相互层叠，已经反复敲打板子数次，散开效果仍不明显，不知道为什么，以前铺别的板子的时候没发现有这问题，所以想请各位朋友帮忙分析一下，提点建议。。# d( f& Q. T/ T4 N7 v, G! E& t

十分感谢

作者: hljzyydx 时间: 2010-8-3 13:07

不好意思，打错了，是24孔板

作者: xujie158 时间: 2010-8-3 14:10

可以按下面这样做试试吧：
1.加样的时候你的细胞浓度低一些，这样加样时就会体积多一些，我们之前做都是24孔板，每孔加1ml，不要先加细胞悬液再补充培养基，这样就比较容易匀了；
2.加完样轻拍你的板子侧面。旋转着多拍拍，一般都可以比较均匀的。; l1 W; b P4 z& a! G3 c+ X R5 H7 [
最后我感觉就是本来板子中间和边缘力的作用就不一致，可能就会导致你铺的细胞有些不匀！这最后一条没验证过啊！呵呵。

作者: hljzyydx 时间: 2010-8-5 09:59

回复 3# xujie158 $ i0 |& l* H$ o; ]

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呵呵，我试试看，谢谢！

作者: cony 时间: 2010-8-5 20:56

尽量吹打均匀细胞，加样时一滴滴均匀滴在24-well板上。

作者: 小鲁鲁 时间: 2010-8-10 22:10

小弟感觉最好是把细胞浓度调整好了再加入24孔板中，不要在24孔中调整细胞浓度，比如补加之类的。还有就是加完了以后在移动到超净台外面观察的时候会影响细胞的分布，如果对于自己的操作有信心，可以不观察，待细胞贴壁一段时间以后再观察。这个是小弟自己的感觉，如有谬误，请指教。

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-11 21:29

加细胞悬液的时候尽量避免都滴加在中间，加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。

作者: hljzyydx 时间: 2010-8-11 22:11

回复 6# 小鲁鲁 9 g( B6 \# ~9 |! a
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9 L; r- A1 G' `) U' ^9 g! \! B7 y
谢谢，我可以尝试一下，但是对自己的实力还是怀疑啊，呵呵！

作者: hljzyydx 时间: 2010-8-11 22:12

回复 7# 懵懂干细胞 , D9 l: H7 j8 C. Z- k
, O9 r; v. c% X8 ^8 y* k8 s4 d1 t

其实我加液体的时候一直没有加到中间，但是静下观察的时候就发现聚集现象，我甚至怀疑24板是不是中间有一点点凹陷啊

作者: hljzyydx 时间: 2010-8-11 22:15

回复 3# xujie158

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麻烦问一下，你们先加悬液，后加培养液，是不是加完了培养液后要用枪混匀呢？谢谢

作者: xujie158 时间: 2010-8-11 22:51

回复 10# hljzyydx ) `3 L9 X1 g: `, ^# I" ?" F
我们一般都是稀释到一定浓度，直接加入悬液，就不补充培养基了，先加悬液后补培养基很容易就不匀了！

作者: xujie158 时间: 2010-8-12 08:46

回复 10# hljzyydx . h; F! D) {4 }' n
你怎么还不懂我的意思呢？呵呵，我们是直接加稀释好的悬液，不是先加悬液再补培养基！比如你一个孔总共要铺2×10∧5细胞，你计划这个孔加1ml培养基，你就把细胞稀释成2×10∧5cell/ml，直接加1ml，如果你计划这个孔加2ml培养基，你就把细胞稀释成10∧5cell/ml，直接加2ml！
我的表达能力我都开始质疑了，我感觉能说明白啊！呵呵！

作者: chuanbaozang 时间: 2010-8-12 09:56

我都是加完细胞悬液后按顺时针或者逆时针方向轻轻晃动下
就是先将一侧放低，然后再顺着放低另一侧，这样可以让细胞均匀的铺在底部，: k0 A: d, v0 J' X& \
效果不错的，可以试试

作者: exin11 时间: 2010-8-12 10:32

可能原因还是滴加时，没有均匀滴加。24孔板不知道你是用的哪个公司的，质量差别很大，也会出现问题。

作者: flydayzhu 时间: 2010-8-12 22:07

加完后可以前后左右晃动一下，相对会均匀些

作者: hndxws 时间: 2010-8-12 22:40

还有一个原因，可能是24孔板质量不行，换个好的。有的板底面不是平的，怎么弄都会使细胞集中在中间的。

作者: 小熊不杀生 时间: 2010-8-17 15:56

其实，我觉得这个和加细胞时的方向有关系，一般都是右力手，向左侧注入，所以铺板之后轻拍板底，或者像楼上说的，按着各个方向边晃边拍

作者: btyou8u 时间: 2010-8-19 14:55

铺板之前调整好细胞浓度，每个孔只加一次. L; G: v* k3 [/ A" J, }
铺板之前用无血清培养基润孔，1毫升即可，丢弃后直接加细胞悬液，前后左右晃三次，平置，可以保证铺板非常均匀。

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-19 21:11

好像有人说把液先全部滴在旁边一个地方再晃几回就可以啦！

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