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标题: 改进的细胞冻存方法 [打印本页]
作者: 懵懂干细胞    时间: 2010-8-5 21:40     标题: 改进的细胞冻存方法

前些日子在生物网站上看到的方法。分享给大家！希望对大家有所帮助。 细胞冻存方法的改进.doc (71 KB)

附件: 细胞冻存方法的改进.doc (2010-8-5 21:40, 71 KB) / 下载次数 402
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=MTE4MzR8OGRmNmUxNDh8MTc5MzE0NDQ3MXww
作者: mojai    时间: 2010-8-5 22:04

谢谢，试一试，看看效果如何
作者: cony    时间: 2010-8-5 22:59

谢谢
作者: xiyanglangke    时间: 2010-8-25 11:13

谢谢分享！
作者: exin11    时间: 2010-8-25 11:21

xiexie
作者: zhbshi998    时间: 2010-9-1 15:10

thanks
作者: abu2008    时间: 2010-9-1 16:47

用泡沫作为缓慢降温的方法不都很普及了嘛 一般的细胞多包几层纸 直接放-80就好了 24h后转移到液氮 对于干细胞等娇气点的细胞则要比较严格时间和温度降温，这是我的经历。
作者: djl    时间: 2010-9-4 11:00

我们实验室刚买了两个细胞冻存盒，冻存效果不错。国外也都用的这样的冻存盒。只不过有点贵，将近600一个。
作者: 懵懂干细胞    时间: 2010-9-4 22:36

回复 8# djl 1 p; c! @1 d+ j" E# q
, S" _0 I" j0 |( i2 P' B7 M- o; I; ^8 y
哈哈！做细胞实验那就是在烧钱呢！关键是看烧完钱后留下的是什么咯！加油！
作者: 透明微笑    时间: 2010-9-26 13:16

用细胞冻存盒，其实用起来也不贵，反复用的东西
作者: chinajinlei    时间: 2010-9-26 23:21

谢谢您的分享
作者: 淡定    时间: 2010-9-27 09:50

谢谢分享哈
作者: xinxin    时间: 2010-10-7 11:35

谢谢分享
作者: chiangmax    时间: 2010-10-7 14:12

在国内用专门冻存盒，结果出去四年一直用BD的泡沫盒。贼好用。
1 A! Z- H+ N0 I& g, n) U# H不过在这里成了技术改进，不知道发文章还是申请专利了没有。
作者: 懵懂干细胞    时间: 2010-10-7 14:47

回复 14# chiangmax
) D; Y# u( [" I( n. B这个是生物通于8月份左右公布的信息和方法！
作者: ivy叶子    时间: 2010-10-21 11:17

谢谢分享！
作者: wenfeng8212    时间: 2010-10-26 10:49

下来看看哈
作者: sijicc    时间: 2010-10-26 14:17

买程序降温盒。。。谢谢
作者: 古雅森林    时间: 2010-11-10 19:46

有很多有经验的老师喜欢把细胞冻存管放在异丙醇中冻存，利用异丙醇的自身梯度降温的特性也能达到很好的效果。大部分的报道都是关于温度对细胞的影响而很少有冻存液对细胞冻存效果影响的报道。dmso在低温的环境里对细胞具有保护作用，但是在复苏的时候对祖细胞的活性是有影响的，大家有没有什么解决方法呢？
作者: 可怜的孩子    时间: 2010-11-12 16:04

谢谢了
作者: sannia    时间: 2010-11-12 18:26

上次我们实验室的冻存盒都被用光了，我只好按照这个方法用泡沫试了一次。5 X* c6 A& N3 _2 d8 r- @2 ]$ e
感觉效果还不错。
作者: 我爱光明2009    时间: 2010-11-13 17:08

试试看，PAA出的细胞冻存液倒是试过，直接放-80度，保存半年存活率还是很好，就是价格贵。娇贵细胞可以试试！！
作者: zuming    时间: 2010-11-15 16:04

一直都在用泡沫，呵呵！
作者: 懵懂干细胞    时间: 2010-11-15 17:18

回复 23# zuming 3 l" Q) H) l! [0 ^5 ?3 ?2 X$ W. B
效果怎么样？应该还行吧！我觉得泡沫比冻存盒好，里面的异丙醇味道太难闻了，还时不时要换这玩意！真受不了！
作者: cc1986    时间: 2010-11-15 21:04

学习了~~
作者: cc1986    时间: 2010-11-15 21:04

学习了~~
作者: zuming    时间: 2010-11-16 11:19

回复 24# 懵懂干细胞
# U7 P3 X1 G! G( F! w- U效果还不错，目前没发现啥问题。
作者: regene    时间: 2010-11-16 18:42

谢谢分享～～
作者: dengyuan9    时间: 2010-11-18 00:03

直接用冻存盒岂不更好。
作者: 大笨鸟    时间: 2010-11-21 19:59

谢谢分享
作者: wanghuantjmu    时间: 2010-11-23 16:54

谢谢。来看看
作者: nculsa747    时间: 2010-11-25 18:44

咱不差那一点钱！如果日后复苏不成，耽误了实验进展，岂不糟糕！就在昨天，师姐有几盘PLAT E，传代后还有5ml细胞悬液没有用，我说丢掉算了，反正它长的快。师姐说还是冻上吧，不然多浪费。当时异丙醇冻存盒还在－80度冰箱里，于是就用两块泡沫盒扣起来放在-80度了。复苏效果有待验证。不过，其它几个实验室有这样做的，说是复苏效果还可以。
作者: 懵懂干细胞    时间: 2010-11-25 22:04

回复 32# nculsa747 & s0 A) _, X4 N, e9 |6 L5 R
其实这个方法在国内也一直用着，现在大家不差钱了就不用这方法了！
/ B, C/ W4 _/ h5 y* c不过我个人认为这个方法用于应急应急还是可以的！
作者: nculsa747    时间: 2010-11-26 20:55

回复 19# 古雅森林
# a: E" D- f! i( s4 }( l4 ^
2 u5 [1 ]. W% u) O5 l$ r
+ ?( C+ {: `, O$ ~: E5 J/ u解决的办法就是：在常温下尽量减少细胞与其接触的时间。冻存的细胞液装入冻存管后立即放在－80度冰箱。
作者: Temin    时间: 2010-11-27 11:47

本帖最后由 Temin 于 2010-11-27 11:49 编辑 9 q% H$ ]% _5 m- i4 Y4 u: H! _
有很多有经验的老师喜欢把细胞冻存管放在异丙醇中冻存，利用异丙醇的自身梯度降温的特性也能达到很好的效果 ...
: V+ ~. S: S' H3 p2 B9 g$ y古雅森林 发表于 2010-11-10 19:46
( z& k8 x# Z2 P+ u8 D5 S
一种方法是把水浴锅跳到39度～40度，晃动快速解冻冻存的细胞，注意冰块消失后立即拿出水浴锅，用酒精棉擦一擦，然后把细胞从冻存管里吸出，加到到已加好10ML预热Medium的15ML离心管中，颠倒混一混，然后台式离心机离心1000rpm，5min。弃含DMSO的上清，细胞沉淀用新鲜Medium重悬，在Dish里面培养。
/ I. X& G4 Z! m1 {这是通常的去除DMSO方法，但是一般细胞状态好的话，DMSO不会造成什么影响，有人觉得离心会对细胞造成损伤，所以在细胞解冻后，直接加到Dish里面培养，不离心去除DMSO，待4-8小时（或者培养过夜）细胞贴壁后更换Medium即可。
4 {+ X) t3 r) c9 h8 L' o% k1 w
  v* \' t$ W4 B8 C3 |% d+ w对于冻存细胞，我还是觉得有条件的话，使用细胞冻存盒，注意每5次更换异丙醇，这样每次冻存细胞的条件一致。而且，这样冻存条件能保证高达95%-98%以上的细胞存活率。
作者: lunyuyuanxj    时间: 2010-12-3 19:10

谢谢分享
作者: mmssyyee    时间: 2010-12-5 22:05

感谢分享。。。



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