干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 细胞污染问题 [打印本页]

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-10 22:10 标题: 细胞污染问题

各位大侠你们好，老是听师兄师姐说，细胞要是被污染了培养液在颜色上的变化就会很明显，跟正常细胞很不一样，到时候真的污染了的话一看就知道。可是我就是想知道293细胞在培养过程中要是霉菌或其它菌类污染会有什么可见的现象，另外被病毒污染了又会有什么显然的现象？产生这些现象的原因是什么？要是那个大侠能把被污染现象明显的照片也发给我的话，小生感激不尽！

作者: sfk06 时间: 2010-8-10 22:56

目前细胞污染没有特别有效的处理办法，只有把它扔了！细胞被霉菌污染后，会有大量漂浮状物质，一看就知道，在显微镜下黑乎乎的！若是贴壁细胞细胞会飘起来死亡！你的是什么情况？

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-10 23:25

回复 2# sfk06
谢谢解答。我只是想知道会是什么样的情况，我自己传了一瓶特意污染了，等明天看看什么现象。霉菌污染的话，会有一块浮在培养液肉眼可见的菌团，而且日渐长大。( K/ k0 t l& P+ ~ Y$ k2 q
等我明天观察看了现象之后再跟你分享！

作者: 胡问成 时间: 2010-8-11 02:05

回复 3# 懵懂干细胞 : G) @( e/ s8 K3 R) J/ l3 V

8 w% U" \2 y$ L: Y' ?" l- Z
细菌繁殖很快，比细胞还快很多，如果被一般的细菌污染在早期只能看到很多小点点在细胞周围动或跑，过十几个小时培养基就会变黄，镜下很多小点点，如果是真菌的话在早期是丝状，有时和血清里的渣子不易区分，后成放射状，一团，黄色或黑色，在污染早期可用10乘的PS（细菌）或两性霉素（真菌）来压，8小时换一次，连续2-3次，293细胞有时会被污染支原体，支原体太小不好看。至于病毒污染就更难确定，但病毒污染一般不会发生，主要是保存隔离好自己用过的病毒，照足细胞台紫外，防止交叉污染。忠告：对于污染，最主要还是严格标准的无菌操作，做细胞宁可慢些也不能随意。

作者: ruochenzu 时间: 2010-8-11 08:41

学习了

作者: smy124920 时间: 2010-8-11 12:36

细菌污染，培养基变黄，变得很浑浊，看一眼就能看出来

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-11 15:17

向大家汇报。我昨天晚上21.30传代的时候故意污染了一小瓶，不过到现在15.10现象还不是很明显，对比正常细胞的话，在镜下观看的时候被污染细胞看起来比较暗，就是有点浑浊了。进一步的现象有待晚些时候观看！晚上再做汇报！

作者: 轩辕之客 时间: 2010-8-11 18:05

一般就是注意严格操作，一般不会污染。污染了一般细胞状态和正常有很大差别，最明显的就是细胞核变得明显，也可以加大倍数观察，能观察到某些细节，这的污染就只有扔了，如果还没保种的污染了，除了表示同情，没有别的办法了！！

作者: grace 时间: 2010-8-11 18:56

细胞培养中常见污染的类型1 w1 K* J* i1 `- N
1. 细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。
  一、细菌污染
   细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。8 K4 h* ~! |  \% P, V
培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。3 ^( Q) g' p3 h! D
  二、真菌污染/ p, R  y' P: L5 n/ e' H' `0 q8 e: w
   真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。* [1 y/ J8 v( C' M" p6 v& {3 I4 T4 g, l
培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间。个体细小，有增多趋势。镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。/ z% u( m3 }+ h9 ^# o- N$ g9 ^
  三、支原体污染
   支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。电镜下可见其有三层结构，无细胞壁，中央有电子密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。
   培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。
  四、病毒污染+ B" z! K  b6 G& }+ p
   采用组织细胞培养法生产疫苗，如果没有除去潜在病毒的组织培养物，会产生病毒污染。目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。若二倍体细胞系有SV40或多发瘤病毒，B淋巴细胞含EB病毒，细胞和会发生变异、转化，形成异倍体的细胞系。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。
  五、非同种细胞污染$ S2 v/ r/ Z" [7 t. a6 p
   由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，操作不当，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。如“灵长类”细胞系发现猴和鼠类细胞的混合物，ERK/KD细胞是从兔肾中分离出来的，而现在句却认为是HeLa细胞。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。
非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生，大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。

作者: sunyucheng 时间: 2010-8-11 20:42

若是黑焦虫污染了怎么办，血清来源的。

作者: zx19851985 时间: 2010-8-11 20:56

回复 7# 懵懂干细胞

注意培养箱中其他的细胞不要被污染了

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-11 21:14

回复 11# zx19851985 8 b+ J @9 |2 j0 b: T5 J, s
恩谢谢! {* h$ W& z9 z9 Q- m( y/ K
9 p1 W9 P1 n o+ `
) C! {% h9 g: I9 {4 K
提醒。我早就转移了！

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-11 22:54

刚刚去观察了一下细胞，发现现象还不是很明显。跟早上差不多。

作者: xujie158 时间: 2010-8-12 08:55

回复 7# 懵懂干细胞
故意把细胞弄污染还是第一次听说，感觉不大理解，为什么要这么做呢？
感觉这样做就是在浪费，而且不担心把别人细胞也弄污染吗？
有些东西，知道有这么种情况就好了，哪天出现问题了可以分析，没必要非得马上把它实践了吧？在一方面，现在网络很发达，直接查下图什么的也好啊！+ K R0 t6 j& T+ T1 h
说个不恰当的比方，大家知道酒后驾车可能会出车祸，难道非要尝试下喝醉后啥感觉，车祸怎么出的吗？ `: ^) e1 }4 |0 s R: X
不是人身攻击，只是很费解！

作者: flydayzhu 时间: 2010-8-12 10:16

细胞污染的处理：8 j- Z& k% s/ e
对于一般的细胞，最好舍弃* d# C$ R- M( i" D& R
对于比较珍贵的细胞，可采用如下方法处理：用胰酶消化后血清终止，离心（800rpm，5min），用双抗1重悬，过几分钟后离心，用双抗2重悬，离心，双抗3重悬，离心，培养基重悬，铺板。其中双抗浓度1>2>3,具体浓度有待询问。& Y" l" ?! z! f* ]7 e8 ~
此为邓宏魁实验室的处理方法

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-12 15:34

回复 14# xujie158
我把细胞转移至病毒培养箱里面去了。应该不会污染别人的，我也是用了一点点观察观察，就用掉一点点东西，传代的时候多余细胞液是扔掉。
想见识一下真正的现实现象！

作者: xujie158 时间: 2010-8-13 09:19

回复 16# 懵懂干细胞
哦呵呵

作者: 2005150122 时间: 2010-8-13 16:15

学习学习！

作者: happyending 时间: 2010-8-14 08:45

学习中，才开始接触，我想问大家做细胞培养时加抗生素吗？还有什么叫token freeze啊？

作者: 841961279 时间: 2010-8-22 23:39

这种情况我还没碰到过，但听说很恐怖，因此建议你停止养细胞，彻底消毒所有用于细胞培养的一切用品，包括所用的培养瓶，培养基，吸管，胰酶，孵箱，超净台、空间等等你能想到的和细胞培养相关的所有物品。一个星期后，再复苏污染之前冻存的细胞，注意你的白大衣衣袖污染。

作者: exin11 时间: 2010-8-23 08:21

continune

作者: cony 时间: 2010-8-23 10:44

刚对培养箱进行消毒处理，

作者: youyou0795 时间: 2010-8-23 11:07

细胞染菌最明显的就是培基变混，显微镜下有细沙状或者大块颗粒漂浮物

作者: youyou0795 时间: 2010-8-23 11:09

上次我们买了一批四季青的就出现过黑胶虫污染这种问题，只能换血清了 p. V0 E8 _) d" W
黑胶虫开始不怎么影响细胞生长，只有细胞生长一定时间后，多到一定程度就会抑制细胞生长了。回复 10# sunyucheng

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)