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标题: 细胞污染了是什么原因？ [打印本页]

作者: zhao__jc 时间: 2010-8-15 23:16 标题: 细胞污染了是什么原因？

本帖最后由 zhao__jc 于 2010-8-15 23:17 编辑

我培养的sf9昆虫细胞污染了，里面可以看到有些会动的虫虫，像蝌蚪一样，请问是什么东西啊？什么原因可以造成这样的污染？哪位高手赐教？

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-15 23:26

细胞培养中细胞污染的微生物污染源主要有：细菌、真菌、支原体、病毒、非同种细胞
细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。
　　培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。
真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。 6 ?4 o8 \1 _' q2 t2 e' b
　　培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。
　　真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-15 23:26

支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件下生存，对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。
　　培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。

　　组织细胞培养过程中，如果没有除去潜在的病毒，就会产生病毒污染。目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。 . L6 F; Y( f9 ]% y" {
　　尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-15 23:27

防止污染方法' i1 K6 {9 ?5 p) o. ]
一般预防可从以下几方面着手： 2 ^+ j/ N4 G- N! ?8 S/ D
　　1、添加抗生素
　　2、从物品、用品消毒灭菌着手
　　细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。 # m4 \; I) J2 s8 g& H
　　操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。 % B( n$ R* N, b# W: _% z7 |6 l9 n
　　3、从操作者做起
　　（1）进无菌室前要用肥皂洗手，按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。
　　（2）操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。 1 V L$ `2 n1 b1 b- _/ w1 X
　　（3）操作时要常更换吸管，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。
　　4、防止细胞交叉污染
　　在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分。 , `" k) u( ~7 |8 \; F) m! _
　　在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。
　　细胞一旦购置或从别处引入，均应及早留种冻存，一旦发生污染可重新复苏培养。
　　5、无菌室的彻底消毒 8 o0 Y, Z2 N$ X* e- M$ v
　　1) 0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室； % c3 [5 d% w( N6 k
　　2）甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气休对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。

作者: 懵懂干细胞 时间: 2010-8-15 23:28

污染问题只有你亲身体验了你就知道啦！恭喜你，又学到了很多吧！

作者: catheryne 时间: 2010-8-16 00:04

正在为培养瓶中的小黑点发愁，真是雪中送炭啊

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