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标题: 核型分析G显带技术(附图） [打印本页]

作者: liulilin 时间: 2010-9-1 16:55 标题: 核型分析G显带技术(附图）

本帖最后由细胞海洋于 2010-9-1 18:26 编辑 ! r) a/ x8 v& Q' ?4 R; E
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本人最近作染色体核型分析G显带，在G显带这一个总是得不到理想的G显带图片。我所用的方法是，（1）滴完片子之后75°烘烤3-4小时，室温放置过夜老化。（2）在消化前放在37°烘箱烘烤30分钟，（3）采用PBS配制胰酶配成浓度为0.025％，（4）将配制好的胰酶放在37°水浴锅里保持恒温，（5）消化2分钟左右。（6）立即取出在蒸馏水中涮洗两次。（7）染色，（8）显微镜下观察结果。7 P+ t2 `$ L$ t5 l+ j  M7 V
   如下是我制作的结果图。    请各路高手指点指点多多指点！

图片附件: 1.jpg (2010-9-1 16:54, 16.71 KB) / 下载次数 917
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作者: zpzp0312 时间: 2010-9-1 20:08

这是什么细胞的染色体啊？
另外，是什么动物的？7 i. M' u( }" D& R& A D- e# {1 K
有多少条？2 R! G; o1 _5 _+ M- D
怎么感觉数不清楚？

作者: liulilin 时间: 2010-9-2 08:34

回复 2# zpzp0312
' O7 i: x- n0 g: A2 l

您好这是人淋巴细胞的的，是的条数是不够，但是我想探讨的是如何得到清晰的“深浅”显带效果图，请指教！

作者: zoutaoyuan 时间: 2010-9-2 10:52

胰酶的消化时间要根据环境温湿度和玻片上的细胞密度决定/ y, x' u8 `1 L$ U* O
第二张图2点钟方向那条稍长的建议在镜下多看一下

作者: hawkyiger 时间: 2010-9-2 13:19

最近也在做间充质干细胞的G带显色，结果总是很不好，你能把详细点的步骤给我看看么，借鉴一下

作者: panyanfei 时间: 2010-9-2 14:22

这跟胰酶的浓度也有关吧

作者: lifescience1 时间: 2010-9-2 15:07

本帖最后由 lifescience1 于 2010-9-2 15:08 编辑

应该是用吉姆萨液染色液染色的吧有可能是苏木精染液染色的哈他们的染色有点相似

作者: liulilin 时间: 2010-9-2 19:52

回复 5# hawkyiger 2 m$ j: v0 y5 B  O" g
7 Y7 e  ?3 h* I7 E* a

滴完片子之后75°烘烤4小时，室温放置过夜（因为烘烤完一般都是晚上了），第二天做前37°烘烤30分钟，  然后就是用PBS将胰酶配成百分之0.025的浓度，并且将消化缸放置于30°水浴中保持胰酶消化液的温度恒定，然后就是消化2分钟左右（具体时间具体定），快速在蒸馏水中涮洗两次。百分之十吉姆萨染色3分钟。

作者: zpzp0312 时间: 2010-9-2 20:52

我怎么记得胰酶浓度是0.25％
是不是楼主消化程度有些低啊？

作者: hawkyiger 时间: 2010-9-3 16:29

回复 8# liulilin
胰酶看到一般介绍是0.25%，0.025%会不会太低

作者: liulilin 时间: 2010-9-3 18:15

回复 10# hawkyiger

没有的，在做G显带消化的胰酶浓度一般都要配置在为0.025%-0.005%之间，但是一般惯用0.025%。

作者: dxb1985 时间: 2010-9-3 18:45

很多方法是0.025%，消化时间有点长，感觉染色体两臂被消化掉了。

作者: liulilin 时间: 2010-9-3 19:04

给大家看看标准图和我最近做的图

我做的与医院的还有较大差距。

图片附件: [标准图] G显带标准图.jpg (2010-9-3 18:16, 22.89 KB) / 下载次数 182
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图片附件: [我自己做的图] 我.jpg (2010-9-3 19:03, 11.05 KB) / 下载次数 192
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作者: 天鹅骨 时间: 2010-9-4 18:48

差别大吗？感觉挺好的啊

作者: liulilin 时间: 2010-9-5 08:19

回复 14# 天鹅骨 ! Q* |+ c, } u+ q: J- V1 i5 a1 m
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是啊我现在看看也还可以可惜就是不稳定啊，
昨晚忽然想到可能是片子老化不均匀，即染色体上的固定液挥发不彻底，所有导致同一个片子上有的消化过了，有的没有消化动。等我改进再做了看看效果再与大家交流得失。

作者: illidancui 时间: 2010-9-7 19:28

本科在遗传实验室做过一段时间淋巴细胞g带染色，好像跟低渗时间和滴片高度湿度什么都有关系。看楼主第二个片子感觉挺好的，低渗时间长点，高度高点可能就会散的更开一点吧。带的数量应该够了。

作者: liulilin 时间: 2010-9-8 16:35

几乎所有资料显示：75°烘烤3小时，我以前就是按照资料做的。. b1 V' w X% o6 U+ t" X
在几经推测之下，在加长烘烤时间的情况下，75°烘烤16小时，（0.025%消化90秒）。终于做出了很不错的结果。
此贴算是可以圆满的结束了。8 F/ @$ B( _9 J
感谢大家对贴的关注，

作者: koilai 时间: 2010-10-25 13:23

拍的图片还可以，至于你得不到好的结果，是因为你的得到的分裂相数量过少，你通过调整秋水仙素的浓度和处理时间，得到较多分裂相后，一定能找到合适的图，一片玻片至少可以找到十个以上分裂相才比较有统计学上的意义

作者: kokocream 时间: 2011-1-19 15:32

请问，你上面照的片子是多少倍，什么镜子能看清楚？

作者: farmer 时间: 2011-6-14 09:30

学习了

作者: he_liang 时间: 2011-7-1 15:21

楼主做得真好！可以跟医院有的拼了！想问一下，要是老化后的片子没有及时消化，如何保存片子呢？

作者: narajie 时间: 2011-10-17 16:07

你好，我现在做的显带也像你刚刚开始那样，后来你怎么做出后面那两张图那么好的？能告知下怎么做的么？

作者: open1230 时间: 2011-10-27 17:08

回复 liulilin 的帖子1 h$ g3 m/ F1 M( {$ g0 v

请问G带染色是在多大倍数显微镜下观察的？

作者: liulilin 时间: 2011-10-28 11:58

回复 open1230 的帖子- A0 t: R! b" q1 Z

1000倍也就是 100倍物镜 + 10被目镜

作者: liulilin 时间: 2011-10-28 12:00

回复 he_liang 的帖子

37度保存

作者: liulilin 时间: 2011-10-28 12:01

回复 narajie 的帖子
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后来的是 75°烘烤16小时做的。

作者: narajie 时间: 2011-10-28 15:26

回复 liulilin 的帖子6 a9 i8 d% w. N0 g# L

就只是这样就稳定么？因为我现在也是像你刚发帖那时候那样..后来逐渐有一点，但是一般显得好的10几张片就1个视野不错...能不能分享下你的整个实验步骤？我烤过夜之后消化染色体会出现空泡状那样？

作者: liulilin 时间: 2011-12-4 10:21

回复 narajie 的帖子. w- Q& O) N6 n8 m0 r
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这还有一个最最关键的就是摸索胰酶消化的浓度和消化时间，你说的出现空泡状是因为消化过渡。

作者: narajie 时间: 2011-12-16 10:46

回复 liulilin 的帖子

恩恩，的确这个不好把握，唉..-0-

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