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标题: 想与大家讨论几个脂肪间充质干细胞的问题！ [打印本页]

作者: feifei105 时间: 2010-9-3 20:32 标题: 想与大家讨论几个脂肪间充质干细胞的问题！

本帖最后由 feifei105 于 2010-9-3 20:46 编辑 _3 u* p9 G U# R0 M

最近阅读几篇文献，发现几个问题，不知如何解决，希望与大家讨论一下。
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1.有人通过脂肪组织的免疫组化发现脂肪间充质干细胞定位于毛细血管外围，紧贴着血管外壁，还有人认为ADSC是血管外壁的组成细胞，诱导可分化为血管平滑肌细胞和内皮细胞，在血管发生，修复等过程中起着重要作用，所以也可以称之为血管干细胞。大家怎么看待ADSC也可叫做血管干细胞的问题？
参考文献见附件1：这篇综述影响因子不高，但实验室还可以，而且对于刚接触不久ADSC的我来说，觉得写得还好，大家可以参考下。
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2.如何证实一个蛋白在ADSC上的表达？其关键就是ADSC目前无特异的标记Marker。附件文献2是个典型的代表：首先它没采用流式方法检测一系列抗原CD44 CD90 CD105等等阳性，CD31阴性来证实其细胞是ADSC，而是采用诱导其成脂肪，成骨并染色的方法，发文章时这样做是否可行？是否被认可？其次，证明目的蛋白在ADSC上表达时，用的是F-actin和目的蛋白的抗体双染，这样做是否有说服力？这个问题怎么解决，困扰我很久，难道要用CD90（＋）目的蛋白（＋）；CD105(+) 目的蛋白（＋）;CD31（－）目的蛋白（－），进行多组双染吗？

3.问几个基础的问题：⑴ 我看有些文献在消化脂肪组织时用胶原酶和0.1％BSA，请问BSA 在其中起什么作用呢？必须要加吗？3 Q4 u. b) d6 F$ h0 a8 o
⑵ 如果分离人的脂肪干，组织来源最好是皮下脂肪，还是肠系膜处脂肪，还是其他？我担心肠系膜处的细胞种类比较复杂。
⑶ 看到有人说分离人的脂肪干时，有性别之说，就是男的好分好养，女的相对难些？如果有，有这方面的文献吗？

希望大家多多讨论.1 b/ O" @( U1 A: N
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作者: feifei105 时间: 2010-9-5 09:49

怎么没人讨论呀，我自己再顶下！

作者: 木木ly 时间: 2010-9-5 19:38

回复 2# feifei105 ; R. W, Q; @7 k) s! e5 T# ]4 L
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问的好，可惜我做的不是这方面的，而且也是新手，像你学习

作者: 碧海蓝天 时间: 2010-9-5 20:25

你的问题很多，除非和你做一样的课题，很难回答你的所有问题，不过我非常愿意和你探讨一些问题9 f* Y$ X! e, D. t% e) }5 A- x
2.如何证实一个蛋白在ADSC上的表达？其关键就是ADSC目前无特异的标记Marker。附件文献2是个典型的代表：首先它没采用流式方法检测一系列抗原CD44 CD90 CD105等等阳性，CD31阴性来证实其细胞是ADSC，而是采用诱导其成脂肪，成骨并染色的方法，发文章时这样做是否可行？是否被认可？
对于这个问题就是我当时做干细胞进遇到的一个现实问题，当时已有许多文献对干细胞的鉴定做了很多研究，大家普遍认同的就是干细胞一系列抗原的表达，但是单一的抗原对于干细胞又没有特异性，用流式检测抗原的表达也是一种筛查，而且就流式的结果来说想要知道分离的细胞当中干细胞的纯度也是不准确的，最要命是的每一种抗体都是单克隆抗体，如果用进口的话都死贵死贵，光鉴定干细胞就花很多钱，还有一点就是鉴定出来还只是重复别人的实验，有点得不偿失，我最后决定用细胞的免疫组化和诱导成脂、成骨来做鉴定，因为干细胞的分离培养与鉴定大家已经比较认同，这些实验都是课题的基础，很多实验室都是很多年前做的结果建立的分离培养方法，之后就不再做鉴定而是一直做后续的课题，关键是看你的课题是不是很有意义，你的内容好的话也可以发好文章，要对自己有信心。重复别人的劳动是对自己的一种犯罪。

作者: 民族围观英雄 时间: 2010-9-5 22:15

这个问题问的好，围观下。我回答第3个，0.1％BSA可以不加

作者: jqm12345 时间: 2010-9-6 10:23

有的文献是认为脂肪间充质干细胞来源于血管基质细胞，所以叫它血管干细胞也有一定的道理

作者: mikeli 时间: 2010-9-6 23:39

随便谈点看法：( u5 ~9 Q4 |, }
2、关于间充质干细胞上某一蛋白的表达。如果说你研究的间充质干细胞是分离出来的话，那么只要你分离得到的细胞比较纯就可以直接检测目的蛋白。说到干细胞的纯度，不好确定。但是，如果你分离的干细胞，用一系列的抗原去检测了，发现每个抗原的纯度都在90%以上的话，那我觉得这个干细胞的纯度应该还是比较高的。不排除这些抗原有不是同时表达在同一个细胞上的，但是，我觉得在如此高纯度的检测结果下，应该还是比较一致的。
此外，对于干细胞的确定，我个人认为，细胞的多向分化能力的重要性要高于表面标志物的表达。因为多向分化才是间充质干细胞的比较根本的性质。

作者: feifei105 时间: 2010-9-7 22:07

谢谢大家的讨论。我觉得碧海蓝天说的非常有道理，花那么多钱也才刚刚做了个基础，不是实质性的东西，我以前就怕不用流式筛查检测的实验室都是有一定基础的，在圈内是被认可的，现在看来采用多向诱导鉴定还是能够被接受的。
请问碧海蓝天你说你采用的鉴定方法是细胞的免疫组化和多向诱导，问下免疫组化是做什么呢？没太看懂，你可以再详细说下不？谢啦！

作者: feifei105 时间: 2010-9-7 22:12

回复 5# 民族围观英雄 : v6 J4 z: C0 Z3 o! U3 M

说明书上写要加0.3-0.5mM/L钙离子和1%BSA，我算了下DMEM培养基中的钙离子浓度是1.8mM/L,所以足够。至于1%BSA很多文献都没有，看来还是可以不加，但不知有啥作用？

作者: feifei105 时间: 2010-9-7 22:30

回复 6# jqm12345

谢谢，我再问个问题哈，呵呵！我用RT-PCR方法粗略的检测目的蛋白在脂肪间充质干细胞上有表达，但这个细胞纯度很差，后来就在纯度很高的骨髓间充质干细胞上检测，但没有此蛋白的表达，我就有点郁闷了，怕是细胞不纯导致的假阳性，但后来查文献发现脂肪干跟血管的密切关系（因为目的蛋白跟血管有非常大的关系），又鉴于两种细胞的差别，所以急需染色进一步鉴定，大家对于脂肪干和骨髓干一些差别怎么看？

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