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标题: 最近也在尝试着分离小鼠的epiblast，请教各位前辈几个问题 [打印本页]

作者: sapery279 时间: 2010-9-4 11:38 标题: 最近也在尝试着分离小鼠的epiblast，请教各位前辈几个问题

最近也在尝试着分离小鼠的epiblast，请教各位前辈几个问题，请大家帮忙：
1.分离时用的是E5.5天的小鼠，品系是ICR，方法是参考epiblast最初的两篇文章，还有小鼠胚胎操作手册上的方法，但是对子宫进行操作时并没有发现类似文章中出现的胚胎结构（为向科研献身的小鼠默哀）。有没有成功分过前辈提供下经验。谢谢！
2.看大家先前的讨论，提到mES向epiSC的转变，将mES放在episc的培养条件下即可。mES的维持主要是LIF，episc主要是activin/Nodal，将生长因子改变就可以吗？feeder还有换培养基时的mES状态有没有严格要求？想求详细的paper,谢谢！
3.楼主提到关于episc形成嵌合体的情况，能否分享下那篇“将EpiSC导入到pre—implantation的囊胚中”这样的文章？谢谢！

作者: smkx 时间: 2010-9-4 20:06

5.5dpc的小鼠很难分离子宫膜和蜕膜。你可以用6.5dpc的分离下试试，或许就会发现。

作者: sapery279 时间: 2010-9-5 14:03

谢谢！请问，着床后早期的胚胎（E5.5-E6.5）有没有什么特别明显的外观可以与周围的组织区分开来？

作者: smkx 时间: 2010-9-5 17:38

回复 3# sapery279
: A+ M# w) c0 `; ]

有的。剥去蜕膜后，小鼠胚胎应该有明显的红色的胚外滋养层和透明的胚体。呈长条状。很容易脱落。

作者: smkx 时间: 2010-9-5 17:40

http://www.stemcell8.cn/thread-19334-1-1.html3 E2 y, h8 l: Q' B
这是视频。

作者: sapery279 时间: 2010-9-5 22:02

回复 5# smkx 8 \2 \9 e! S5 `4 ]; b( x0 Y
( S/ Z$ x% u3 r

谢谢！但是我权限不够，看不到这个视频，能不能提供下可以直接看到的网址，或是发到我的邮箱sapery279@126.com？

作者: smkx 时间: 2010-9-6 19:34

回复 6# sapery279
X) [; y0 }: M6 g3 V7 F7 C

视频已经发送。请验收。

作者: sapery279 时间: 2010-9-6 21:43

回复 7# smkx & T1 A" d$ t6 v2 m0 Q8 t
, O1 s( [3 J1 z, `9 b8 n" e
已收到，非常感谢！

作者: sapery279 时间: 2010-9-6 21:51

本帖最后由细胞海洋于 2013-1-6 21:41 编辑

这个是刚刚找到的一个分离小鼠胚胎6.5天的胚胎的视频，正好可以当个资源将整个操作连在一起。
; L4 @; M: H3 p+ w+ ]8 l% E* N2 S9 k
[flv]http://video.biolab.cn/sources/160.flv[/flv]

作者: l19rna 时间: 2013-1-6 14:25

楼主你搞定了吗？求指教啊，我最近也要分离5.5天dpc小鼠。请问的分离胚胎的器械是要多精细的才好了？我用眼科镊，还是觉得太粗了，胚胎分离的不太好

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