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标题: 急求油红O 染色提取法的原理步骤 [打印本页]

作者: richard_terry 时间: 2010-9-15 09:31 标题: 急求油红O 染色提取法的原理步骤

油红O 染色提取法，先谢谢了
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作者: chuanbaozang 时间: 2010-9-16 08:41

关注中

作者: lxy07 时间: 2012-2-3 08:35

油红O为脂溶性,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料,在脂肪内能高度溶解,从而染色,能保存组织中的脂肪滴- u- t+ J' L* }2 g1 X# ]

染色步骤： 8 u: u( v$ }6 Q% L: s: O$ Z
0 h. Z0 V) w" X- h
1 先小心轻缓倒去培养夜。 8 D) J7 O" ~' o( n; l! c
2 用PBS轻缓漂洗（不洗没问题）。: s: Y  _& I1 Z
3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。甲醛对脂肪没有什么固定，但能固定好脂肪细胞膜，不让脂肪移位。
4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。
5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。 $ s4 w& p# r( \6 n+ d# C/ ~
6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。 9 J, g( ~$ M% u/ A" Y  z( s
7 复染，淡苏木染色1/5分钟，PBS漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。
8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。 ! h- y7 q9 _& {$ u. g  {
9 显微镜观察。 4 a1 Q) a8 P) x

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