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标题: 请教什么是pre-ips？ [打印本页]

作者: mmssyyee 时间: 2010-9-18 22:51 标题: 请教什么是pre-ips？

请教各位，什么是pre-ips？最近看文献，一直搞不懂。由pre-ips转变为真正的ips容易吗？添加那些文献上报道的小分子化合物真的可行吗？

作者: cicadacjk 时间: 2010-9-19 15:30

在重编程过程中，由于外源表达的转录因子使得细胞停留在一个人工的细胞状态，这个细胞在形态上、细胞周期上类似胚胎干细胞，甚至具备一定的分化能力，然而却不表达绝大多数内源的多能性基因。9 O4 r; b4 d: }6 E$ j. H Q
能继续重编程为iPS是pre-iPS的一个主要属性，文献上报道的2i就不要试了，少于2%的pre-iPS对此敏感，大约30%的pre-iPS对TGFbeta受体抑制剂(ALK5i）敏感，超过90%对维生素C敏感，采用简便的方法，可以用KSR直接培养pre-iPS。

作者: mmssyyee 时间: 2010-9-19 17:35

回复 2# cicadacjk

作者: mmssyyee 时间: 2010-9-19 17:43

回复 2# cicadacjk 谢谢您的解答，90%的细胞对VC敏感，有什么依据吗？就是裴端卿教授的那篇文章上说的吗？还有，那是单独使用VC还是需要加上VPA呀？浓度就是文章上报道的吗？如果使用KSR的话，是用的DMEM比较好还是DM/F12好呀？再次感谢！

作者: marrowstem 时间: 2010-9-19 20:33

如果要存在有pre-iPS细胞，就应有pre-pre-iPS细胞，就有pre-…pre…pre-iPS细胞，因为细胞的分化或逆分化过程是一线性发育过程，在每一个时间点上都是一种潜能不一的细胞，是不同的种类细胞。
正如有人针对肿瘤干细胞，而提出也存在癌前干细胞，癌前前干细胞和癌前前前干细胞，分别针对的是癌前病变中的组织轻-中-重度异型增生。

作者: cicadacjk 时间: 2010-9-21 15:02

pre-iPS是我研究的对象之一，研究结果没有发表之前我也不能透露太多信息。
只能告诉你，这是一个非天然状态，并不是重编程都必须经过pre-iPS阶段。
VPA基本上对所有pre-iPS都没有用，VPA必须用在重编程的早期，其中的机理尚不清楚。9 s6 I: F: a* b9 }
KSR培养基我们一般用knockoutDMEM配制，维生素C你按照裴端卿教授的文章加就可以了，提醒一下，必须用2位磷酸化的抗坏血酸，否则极易因为氧化而失效。6 w4 Z$ G, y! `. q- g, [& n
& @ f5 Y1 w# z' ]( [
细胞变化可以一线式，但是否会停留在一个稳定的中间状态就不一定了，有些所谓的概念不过是唬人的而已，事实的真相总要建立在可靠的观察之上。

作者: snokey 时间: 2010-9-25 07:56

请教cicadacjk两个问题：, z/ V1 b* o, D
1. 裴端卿教授文中提到“Addition of mixed antioxidants to KSR medium did not increase the basal low efﬁciency of reprogramming for any of these cell types , and we noticed that KSR already contains antioxidants including Vc.We then switched to a full serum protocol” 他们看到的Vc效果是在FBS条件下的，那么如果用了KSR就不需要再加Vc了？

2. 如果我想试试Vc的效果，请问能把你用过的或者知道的2位磷酸化的抗坏血酸的货号给我吗？谢谢

作者: mmssyyee 时间: 2010-11-8 11:06

回复 6# cicadacjk

9 }7 A/ x% c6 c0 F
您好，我想再请教一下那个VC配的时候是用水配的吗？配好后能用多久啊？谢谢。。。

作者: cicadacjk 时间: 2010-11-8 19:00

我就是用水配的，冻在负二十度，上次配的有半年了吧，还在用。9 j4 F- X: [8 M* \
2磷酸的维生素C在sigma上就一个货号

作者: mmssyyee 时间: 2010-11-16 22:07

回复 9# cicadacjk
w+ b% p6 s+ X6 f( i$ f; ?

谢谢解答。

作者: mmssyyee 时间: 2010-11-16 22:17

回复 9# cicadacjk 4 ]; t( U9 Q* D1 n/ d

再请教一下，对产生的细胞集落进行检测后发现并不是四个因子都在里面，而是只有个别的因子在，但是它也可以传很多代，而且貌似也具有克隆形态，这样的细胞可以成为pre-ips吗？ P6 |0 C! z- G* H
再次感谢！！！

作者: mmssyyee 时间: 2010-11-16 22:18

是“称为”，打错了，不好意思。。。

作者: cicadacjk 时间: 2010-11-17 10:19

所谓的个别因子是什么呢？
我定义的pre-iPS就是在某种刺激下或长期培养下会变成真正的iPS，不管效率高低。另外，核型必须正常。

作者: mmssyyee 时间: 2010-11-17 15:49

回复 13# cicadacjk : `0 b& n5 r9 V
我说的个别因子的意思是，在攻毒感染成纤维细胞的时候，并不一定是四个因子OSKM同时进去，可能是OS进去，或者是oM进去，但是在继续诱导的过程中也会产生那种看起来核质比很大的克隆，但是AP染色的话呈阴性。这种的能称为pre-ips吗，或者说算是部分重编程的细胞吗？你定义的那种pre-ips AP染色是不是也呈阴性的？
谢谢！

作者: cicadacjk 时间: 2010-11-19 19:45

回复 14# mmssyyee
0 X; R% u( k& }- q4 y
" o9 B0 l* d! g5 E1 R
我得到的pre-iPS都是AP阳性的，只是核质比大说明不了什么问题。

作者: iyaofying888 时间: 2010-11-19 21:28

上边那位大哥，养细胞的东西怎么能用水溶呀，应该用pbs才对呀

作者: mmssyyee 时间: 2010-11-20 22:45

回复 16# iyaofying888 / b& z5 ]0 `- E: c' L6 |* L
2 Z' k: A* I9 b& \4 U) e
产品说明书上就是说用水配的。。。

作者: mmssyyee 时间: 2010-11-20 22:47

回复 15# cicadacjk 5 Z/ |5 Y( _- @1 }

% J7 `! v# r0 ?! I- p0 {% C
那是因为内源性的多能因子没有被启动表达，所以才被你称为是pre-ips吗？你的定义的pre-ips是因为它不能形成畸胎瘤或者是嵌合体所以才不能称为是真正的ips吗？

作者: cicadacjk 时间: 2010-11-23 13:21

当然是因为内源的多能性因子没有被激活，同时外源的重编程因子的表达也是必须的。" u7 O- n9 ~9 Q( M* a' i6 h8 g
这样的细胞跟真正的多能干细胞维持机理完全是不一样的，但有几率变过去，所以称为pre-iPS

作者: woaiIPS 时间: 2010-11-23 23:51

PRE-ips最开始研究是在Jose Silva 2008年研究用0 K两个转录因子就可以吧NS(brain-derived neural stem )通过病毒转染法诱导为ips细胞虽然满足大部分鉴定标准，但是不能支持启动内源的OCT4，X染色体失活并没有被激活！不能产生嵌合体！因此把这种克隆认为是PRE-IPS就是没有重编程完全，含有部分分化基因的MARKER，表观记忆没有消除干净！因此继续研究通过2i这个经典的细胞通路抑制子的组合在LIF的作用下成功将PRE-IPS转变为ips并且生出嵌合体！总之 PRE-IPS是没有重编程完全的ips 是细胞线性上的一种特殊形态！

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