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【摘要】 目的： 探讨褪黑激素（melatonin，MT）体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells，MSCs)不同时段向神经细胞分化的情况。方法： 采用细胞培养技术分离培养和纯化大鼠MSCs，以MT为诱导剂诱导大鼠MSCs向神经细胞分化。分别在诱导后3，7，10，14 d以免疫荧光法测定神经干细胞特异性标志(nestin) 、神经元细胞特异性标志(neurofilament, NF)和星形胶质细胞特异性标志(GFAP)的表达。结果： MT诱导分化3 d，部分细胞胞体收缩成三角形,有些成为简单的双极或多极细胞。诱导3 d细胞开始表达nestin, 7～14 d表达 nestin和NF,细胞不表达GFAP。结论： MT可诱导大鼠MSCs分化为神经细胞。 ! Z1 I y3 G7 i( w# P1 M 【关键词】骨髓间充质干细胞； 褪黑激素； 神经细胞1 ^- V8 K) k( e
In vitro melatonin induction of differentiation of marrow& {: f# w# ?% S& N5 M. z) p
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mesenchymal stem cells. m+ u* J+ z/ |
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HE Wei, SHEN Tiecheng, DI Rongke, YANG Yong, ZHANG Zhijian k" `! Q3 m/ M# P1 u! n! d: p3 `/ | u: O3 h4 x; D3 m3 J {
(Department of Orthopedics, Affiliated Hospital, Jiangsu University, Zhenjiang Jiangsu 212001,China) # J1 H" E5 C* x2 | ! D0 Y9 k" O% h9 R ［Abstract］Objective: To explore MT introduce marrow mesenchymal stem cells into neurons on different time. Methods： By using cell culture method, rat MSCs were isolated and purified, The rat MSCs were induced with MT.The expression of nestin,NF and GFAP in the differentiated cells was detected by immunofluorescence after introduced 3,7,10,14 days.Results： Three days after induction with MT some neurons were found to contract, refract more light and protrude and bulge.Some neurons contracted to atriangular shape, and some others became simple bipolar or multipolar cells. After being induced for 3 days, the cells expressed nestin.After 7～14 days, the cells expressed nestin and NF, but didn′t express GFAP.Conclusion： MT can introduce MSCs into neurons.) X8 G$ ?5 R( {+ ^+ X
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［Key words］bone marrow mesenchymal stem cells; melatonin;neuron 3 {' ~! O' a8 K* \0 S# @- Y( G 3 j4 w( S% x! a2 e) y; v脊髓急性损伤是中枢神经系统的一种严重创伤，近来对于其治疗的研究主要在于干细胞的移植。骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells，MSCs)是指一群具有多种分化潜能的成体干细胞, 在适宜条件下可向神经细胞分化。MSCs因其来源广泛、取材容易、可自身获得、体外扩增能力强、能在体外表达多种外源目的基因, 并可在中枢神经系统内存活与迁移等优点, 为神经系统疾病的细胞治疗和基因治疗提供了新的思路［1，2］。本实验拟在不同时段检测褪黑激素（melatonin, MT)体外诱导MSCs向神经元细胞转化过程中细胞的转变，以便获得更好的诱导途径，从而更好地治疗脊髓损伤。$ m- P! H& Q/ b: h, G
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1材料与方法 9 u8 W3 g0 U/ Z: u8 I+ m* V5 X9 ^/ L' O S; A E$ o' g
1.1动物、主要材料及仪器) P3 u w2 E" [! B
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健康雄性SD大鼠，体质量约100 g(江苏大学动物实验中心提供)；LDMEM、胎牛血清、胰蛋白酶(Gbico公司)；Cy3标记的羊抗兔IgG、 MT（Sigma公司）；兔抗大鼠神经元细胞特异性标志（neurofilament,NF)单克隆抗体、兔抗大鼠星形胶质细胞特异性标志(GFAP)单克隆抗体、兔抗大鼠NSE单克隆抗体(博士德公司)；CO2细胞培养孵箱；超净工作台。8 ~3 ?- |1 S; G- G1 b- ^6 T
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本实验在MT诱导的作用下,在不同时段研究MSCs向神经元细胞的转化。在诱导3 d后细胞表达nestin，而不表达NF，7 d后可同时表达两者，GFAP在实验过程中始终不表达。在形态学上诱导4 d后，呈神经元样细胞形态,细胞突起增多,折光性增强。表明MSCs在MT诱导向神经元细胞转化过程中，先向神经干细胞转化，后向神经元细胞转化。本实验初步的研究结果表明，MSCs在MT的诱导作用下可以分化为神经元细胞，为更好地研究骨髓干细胞向神经元细胞转化提供了一定的实验基础。 $ p$ b' W& w& U& M& T W , R1 x% y; o4 \+ W" F ) `& r. n" }; v" x) B! K) p, m! s2 T4 `4 R; t( X7 E
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