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标题: 有关克隆形成率的问题 [打印本页]

作者: zhaoyan1983 时间: 2010-10-15 20:46 标题: 有关克隆形成率的问题

“将消化的ES按每孔100个细胞接种到铺有饲养层的6孔板中，经吉姆萨染色鉴定克隆”。这是文献上的步骤！
但是这100个细胞（当然不一定非要这么准确！）里应该还含有MEF吧，这样的话应该如何统计克隆率？我的意思是说，压根儿就分不清每个孔里大概有多少ES，那最后应怎样统计克隆率

作者: supergama 时间: 2010-10-15 23:07

100个细胞当然不含有MEF，ES先要纯化再做克隆形成率。

作者: zhaoyan1983 时间: 2010-10-15 23:32

回复 2# supergama ) [* L: T7 Z% l

请问要如何纯化才能保证一点不含MEF？

作者: supergama 时间: 2010-10-16 06:36

差数贴壁和密度梯度离心都可以。

作者: xyzxxx 时间: 2010-10-16 07:50

如果樓主提的是小鼠ES細胞的話
ESC看起來非常小非常圓; w% I' Z' G, l5 }6 x% Y
而MEF則大很多而且會成梭狀或不規則胞突
大多數情況下可以輕易分辨出來
0 J" t* ~1 i; T& Q5 y
除此之外長滿後ESC會比MEF相對多很多所以計算上影響不大

作者: djj01 时间: 2010-10-16 11:25

ES先要纯化再密度梯度离心做克隆形成率!

作者: istephen 时间: 2010-10-17 10:59

MEF和ES细胞在外形上还是有很大的差距的另外楼上说的密梯度离心也是常用的方法

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