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标题: 请教，骨髓间充质干细胞成脂诱导，细胞死亡过多，是什么原因？ [打印本页]

作者: biaocold 时间: 2010-10-20 11:25 标题: 请教，骨髓间充质干细胞成脂诱导，细胞死亡过多，是什么原因？

请教，骨髓间充质干细胞成脂诱导，细胞死亡过多，是什么原因？
诱导5天后，基本没有活细胞。

作者: ivantanqi 时间: 2010-10-20 17:46

回楼上，我也遇到过类似的问题，跟细胞的状态，诱导液的成分，换液时间，还有个人的操作，都有关系，但不至于没有活细胞留下来，而且你描述的情况，死亡的过早，可能跟细胞本身有关系。

作者: tanhehe1006 时间: 2010-10-21 10:05

尽管很多地方说是要3d换液，但是换的勤的话细胞是会死亡很多，我是直接放7d，这样细胞存活的较多，而且也能诱导成功

作者: lchanlon 时间: 2010-10-21 10:23

学习了。可来这个实验不是那么好做的。

作者: ivantanqi 时间: 2010-10-21 20:11

你可以发图上来看看

作者: biaocold 时间: 2010-10-22 10:11

可能就是细胞状态的问题，我用的是7代的细胞。可能是状态不太好吧。打算用三代左右的细胞再试一次。

作者: mikeli 时间: 2010-11-5 00:32

楼主可以在诱导三天后，换用普通培养基培养一天，然后再换用诱导培养基三天，如此重复多个循环，应该可以。脂肪诱导比较容易实现，如果你的MSC没有问题的话

作者: illidancui 时间: 2010-11-6 14:44

我的第13天的时候全飘起来了，心疼啊

作者: xiaodiao123 时间: 2010-11-11 16:30

学习

作者: lvmaoshiwo 时间: 2012-2-21 16:08

回复 biaocold 的帖子

我也遇到这样的情况，每两天换液6天左右细胞全漂，之后改为每三天换液，不要老拿出来看细胞，诱导后细胞没有死但是诱导不成功，分化标记基因不上调~

作者: impingfan 时间: 2012-2-21 21:54

可能因为诱导时细胞密度太低

作者: sarah19860420 时间: 2012-2-21 22:59

诱导液中的吲哚美辛浓度以及地塞米松的浓度过高，他们对细胞有一定毒性，试着将浓度降下来即可。

作者: sarah19860420 时间: 2012-2-21 23:00

如果在诱导过程中停下来一天，那样之前的诱导就都浪费了，会延长成脂细胞形成的时间，本人已经做过对照了，O(∩_∩)O~

作者: hhxxattxs123 时间: 2012-6-26 08:36

回复 biaocold 的帖子* ?! d1 R* \5 o1 o& K
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我诱导了7天了，细胞长的很好啊，长的很满，没有出现大量死亡的情况，但是现在还没有出现脂滴，我是成骨和成脂肪一起诱导，现在感觉细胞明显不同了，回头发图片给大家看

作者: hhxxattxs123 时间: 2012-6-26 08:38

回复 tanhehe1006 的帖子3 b c. u" A) ~9 i) ?
+ o8 E% t+ b* O Z
放置7天？我是3天就换液的，细胞状态也很好，诱导正在进行中。。。。

作者: awangling 时间: 2012-6-27 23:22

我的也是，用的GIBIO成品诱导液，成骨成脂都要是，10天左右细胞全凋亡了，不知道是什么原因。
如果是诱导液的成发有毒性太大，那不是GIBIO的产品有问题？？还是……？？

作者: willow0711 时间: 2013-6-5 16:25

回复 awangling 的帖子

你好，请问你后来的诱导都成功了吗？问题出现在那里？谢谢！我也买的现成的诱导液，还没有做，想向你咨询下

作者: willow0711 时间: 2013-6-5 16:29

回复 hhxxattxs123 的帖子, T6 X% `& n/ G. S
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你好，请问你的诱导液是自己配的还是买的成品？结果怎么样？共诱导了几天？谢谢！

作者: zsc78 时间: 2013-6-6 10:14

很同意mikeli 的意见。Caygen的成脂诱导培养基就是有两种培养基交替使用的，有一种就是普通培养基培养后细胞变回梭形，成脂诱导培养基使用后细胞变短。

作者: ljzmy82 时间: 2013-6-6 12:44

我也遇到同样的问题，诱导的细胞密度有很大的影响

作者: huangcong1988 时间: 2013-6-8 09:51

成脂诱导的培养基里面含有化学成份，对于细胞肯定是有毒害作用的，所以刚开始加入诱导液的时候，会有一些细胞变圆，甚至是脱落死亡。/ h7 h. O9 U P6 e7 p
但是这个应该还好，因为诱导的时候，细胞是长到百分之百汇合的，所以死一部分细胞对于整个诱导是没有大影响的

作者: ytumuyangren 时间: 2013-6-9 21:16

骨髓来源的MSC没有碰到过这样的情况，不过脂肪来源的我到时碰到过这样的情况，解决的办法是将IBMX的量减量，或者不用。这样添加成脂诱导液后，细胞就不会漂了，我们用的诱导液都是自己配置的，不知楼主是否是自己配置的。

作者: light_blue 时间: 2013-6-22 09:42

awangling 发表于 2012-6-27 23:22 ' @& q# @0 }& t) R8 z6 A8 M$ K
我的也是，用的GIBIO成品诱导液，成骨成脂都要是，10天左右细胞全凋亡了，不知道是什么原因。& e& B0 K; @# [* u
如果是诱导 ...

我也用的GIBCO的成品诱导液，成骨7天脱壁..成脂7天出结果了,是有一些细胞死亡，不过最后染色结果还不错。感觉细胞死亡可能还和培养液的量与培养环境有关。比如是不是培养箱经常断电与二氧化碳的浓度。

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