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标题: 人间质骨髓干细胞遭污染了！~ [打印本页]

作者: ayeqiu 时间: 2010-11-2 16:32 标题: 人间质骨髓干细胞遭污染了！~

下图是污染的图片. ~; T& T4 R; r
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拍的不是很清楚，现在用两性霉素B处理，复苏后（在冻存前已知道细胞被污染，只是觉得贵重，先冻起来再拯救！）第二天在显微镜下能观察到有少量细胞贴壁，但是换液后的下午再拿出来观察，发现贴壁的细胞还是不见了……

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求助啊~

作者: cc1986 时间: 2010-11-2 23:40

图片太不清楚，密密麻麻的是不是白色念珠菌啊~~
如果知道污染，最好先弄清楚是真菌还是细菌污染，然后用大剂量的抗生素冲击抢救。不过这样下来一般细胞状态也不怎么样了~~

作者: dengyuan9 时间: 2010-11-3 00:10

我同学的神经干细胞也是被白色念珠菌感染了，杯具，再抽一次自己的吧，好让自己下次牢牢记住

作者: ayeqiu 时间: 2010-11-3 08:38

图片太不清楚，密密麻麻的是不是白色念珠菌啊~~
9 p* K( ^, t Z1 L& q9 u如果知道污染，最好先弄清楚是真菌还是细菌污染，然后用大 ...
0 I0 E& h0 A3 S: T- ^cc1986 发表于 2010-11-2 23:40

' T% Q8 q0 U% C2 J+ Z
8 B/ W+ ~- v* a) `0 h0 e2 b
请问你有过相关经验吗？大量的抗生素抢救，指的是双抗吗？请问是如何操作呢？

作者: ayeqiu 时间: 2010-11-3 08:39

我同学的神经干细胞也是被白色念珠菌感染了，杯具，再抽一次自己的吧，好让自己下次牢牢记住
8 C1 _% w7 j6 a0 Y/ [& pdengyuan9 发表于 2010-11-3 00:10

+ g. R6 N3 m' j$ _3 ?8 b- g
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) `3 ?$ U! n% F9 H* {/ T" v$ U
抽自己的血？行得通不？

作者: deron 时间: 2010-11-3 10:11

回复 4# ayeqiu : T. a9 V7 V4 T4 c4 _. s: r' k/ u5 Z0 F

0 r# n' s' p8 l% r' O$ x
弄清楚真菌还是细菌，对症下药比较好。双抗是通用的做法，5~10倍剂量的抗生素培养基处理过夜，然后换液。
如果细胞不是很珍贵，建议扔掉算了~~~~

作者: cc1986 时间: 2010-11-3 10:37

没有经验，一般不怎么抢救，请教了下做过的，如下：
1 真菌污染 & ^4 t; j- s* k2 j1 e
可以使用两性霉素B. 方法：向培养瓶中加入两性霉素使终浓度达25-50ug/ml，冲击4小时，换液。如一次不能除尽，可重复2-3次。但是两性霉素B对细胞损害也是蛮大的。$ k+ Z3 ?5 o5 H
2 细菌污染
有人用10倍的青连霉素冲击法处理。具体操作：弃掉培养基，换上10倍的含有青连霉素的培养基孵育40min后，弃掉培养基，在换上含有10倍的含有青连霉素的培养基培养24hr。如果细菌被杀死，然后换上含有正常浓度抗生素的培养基（P,100U/ml; S, 100ug/ml）。
试试吧，也算积累点经验。

作者: ayeqiu 时间: 2010-11-4 16:28

没有经验，一般不怎么抢救，请教了下做过的，如下：, o0 [ v7 i l) g5 l- m9 n( N
1 真菌污染
4 | u5 q6 c' L* }# g可以使用两性霉素B. 方法：向培养瓶中加 ...
6 U5 ~6 t9 I9 ^# M4 \cc1986 发表于 2010-11-3 10:37

3 w' d S: c" p! B
# T, d+ }& ]3 ^

感谢你的解答~~
我们用25ug/ml的两性霉素B，同时加了7%的双抗处理，第二天换液，发现细胞基本上都死掉了，下图是用PBS反复冲洗后的照片……/ O0 z; \/ @, \: Y4 ?
[attach]16228[/attach][attach]16229[/attach]
细胞没救了~~看来我们用的方法不得当啊，或者是换液时间没掌握好吗？

作者: 皮搋子 时间: 2010-11-4 20:47

给你个建议：
如果已经发现细胞污染，不要因为觉得珍贵就去冻存，冻存很容易发生泄漏污染液氮，从而污染液氮罐中的其他细胞。
当发现污染，又不舍得扔时，应尽早用大量抗生素处理。如果能确定污染属于真菌还是细菌最好，不能建议你用10倍量两性霉素B、庆大、青霉素、链霉素四抗共孵育4h，然后换双倍或单倍量抗生素培养几天观察。这样处理细胞可能比较脆弱，换液时要注意动作要轻柔，不能吹打细胞。

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