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标题: 如何使悬滴产生的EB在培养基中悬浮培养？ [打印本页]

作者: dilal 时间: 2010-11-3 15:23 标题: 如何使悬滴产生的EB在培养基中悬浮培养？

最近在做关于悬滴培养EB分化为心肌细胞方面的实验，但发现悬滴形成的EB取下后在培养基中一天就贴壁生长了。我们设想的是让EB在培养基中悬浮培养4-5天后再贴壁生长。我们尝试了一些方法，如不时的晃动培养板、吸管轻轻吹打等，均达不到理想效果。前一段时间我和师兄尝试了一种胶polyhema铺板后培养EB，虽然EB能够悬浮5-6天，但是EB不生长，而且3-4天后胶开始脱落并跟EB黏在一起了，最终失败而告终。
特发此贴，请教从事这方面的高手指教指教，有没有好的方法使EB悬浮培养？有没有较好的胶既可以让EB悬浮，又不对EB的生长分化有多大影响？请大家多指点一下。

作者: yaner 时间: 2010-11-3 16:19

把摇床放在培养箱里，EB放在摇床上培养

作者: dilal 时间: 2010-11-3 22:28

回复 2# yaner 8 P( [- Q8 K( h2 R: d0 p
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的确是个好方法，但是怎样才能把摇床放在孵箱里？电源在外面的话孵箱就关不严了。此外，EB一直出于晃动状态的话也不利于其生长，EB边缘细胞一直晃动的话容易脱落，不利于其生长。我们主要是想让EB能够悬浮，不要过早贴壁。
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还是感谢你的建议！

作者: cherrydeng2006 时间: 2010-11-4 14:51

EB一般悬浮培养2天后就贴壁培养了，它很容易就贴壁的。
可以试试单个EB养在试管里看看，个人拙见而已。^_^

作者: fish_zbw1985 时间: 2010-11-6 16:49

回复 1# dilal
做EB培养可以使用公司专门生产的超低吸附孔板，EB是肯定不会贴壁的。

作者: dilal 时间: 2010-11-7 00:00

回复 5# fish_zbw1985 ( r( U9 i4 Z( u* o+ @* ?: [

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我最近也查到了EB有两种培养板来悬浮培养，超低吸附培养板及美国BD公司的FALCON表明未处理的培养板。但是我不知道那种培养板更为合适，不知你是否用超低吸附培养板悬浮培养过EB。我想明确一下效果，顺便问一下你用的超低吸附培养板都是那个公司的，中国有没有代理？

作者: 痞子的烟头 时间: 2010-11-7 07:55

正常情况下培养，采用国产DISH ，一般国外的都是包被过的

作者: glysh 时间: 2010-12-30 12:34

我告诉你吧，用那种培养细菌的培养板，国内的就可以，做心肌分化的话，现在盖上悬滴3天，形成大的球体后，收集到皿中，继续培养，非常好用。

作者: chenzhongyan 时间: 2011-1-4 21:17

就用国产的细菌培养皿，浙江拱东的，直径有7厘米和9厘米两种。我们一直用这个，非常好用。

作者: nan123456 时间: 2011-3-8 14:05

国产的细菌培养皿？那不是玻璃的啊？+ E- Y- ^, R0 b! ^: `

作者: fish_zbw1985 时间: 2011-3-8 17:20

回复 dilal 的帖子5 `7 C1 V# \. B7 U3 w

估计我的回复也没啥时效性了吧。如果想省钱，直接用国产的细菌培养皿就可以，如果选择专门的低吸附孔板，我觉得康宁的还行吧，规格比较齐全，从24孔低吸到6孔低吸都有。

作者: afei198520 时间: 2011-3-8 17:48

推荐使用corning的低吸附孔板，效果非常好，比自己用polyhema包被的孔板效果好多了，不过可能会贵一点

作者: wxyWXY 时间: 2011-3-9 00:47

细菌培养板就可以塑料的

作者: xiaomogu1979123 时间: 2011-7-10 10:37

我也做过向心肌方面的分化，将悬滴形成的EB直接贴壁培养也可以向心肌细胞分化，镜下可以看到分化后的细胞可以跳动。没有经过悬浮培养的过程

作者: dilal 时间: 2011-7-26 15:08

回复 glysh 的帖子; O. P$ z1 ~4 s) V1 \

问一下你都用国产什么牌子的细菌培养皿，那个公司的？价格如何？

作者: yangpan521 时间: 2011-9-8 18:59

是的国产培养皿是一次性的塑料皿细胞基本不贴壁

作者: sleevexz 时间: 2012-10-20 19:32

1%琼脂的铺在皿底，再接种EB，EB继续悬浮生长。

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