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标题: 脐带的分离遇到难题 [打印本页]

作者: 清影 时间: 2010-11-5 09:39 标题: 脐带的分离遇到难题

脐带用胰酶消化后过筛很粘稠，什么原因？怎么处理啊？单纯稀释可以么？有没有更好的办法？

作者: ambassador 时间: 2010-11-5 09:47

1.是不是消化的时间不够？
2.是不是没有吹打散开充分？+ T5 k+ `% {% }8 A5 p
3.另一个办法就是换筛。

作者: 清影 时间: 2010-11-5 13:29

0.05%胰酶消化1h(大概每1cm加消化液3-4ml),0.1%胶原酶2消化1h.我刚开始摸索条件，不知道合适不？请指点~~
筛子用的是150目的，大小感觉可以了。: o* X* H+ j3 H& V/ `; w* X; L
咨询了一些人，说法不一，有的说是因为DNA缠绕在一起了，所以我加了DNA裂解酶，效果不是很好；有的说是胶原蛋白的原因，不知道用什么方法可以去除，二硫苏糖醇可以么？

作者: 清影 时间: 2010-11-5 13:32

因为很粘稠，所以分散可能受限，加入了一步离心，效果也不太好

作者: 柏林小杨 时间: 2010-11-5 13:39

目前我就是加大稀释倍数，反复离心洗涤来解决的，但是收集的细胞数也不是很理想。

作者: 清影 时间: 2010-11-8 16:20

谢谢柏林小杨。

，大家要帮帮我哦

作者: xuehu20 时间: 2010-11-9 14:15

遇到同样问题，如果有好的解决方法，要分享啊

作者: 清影 时间: 2010-11-16 09:14

没有人回应哦~~呜
有好的解决方法要分享一下哈

作者: medliujuan 时间: 2010-11-16 09:36

学习了

作者: 12846168 时间: 2010-11-16 09:38

脐带间充质干细胞的分离没那么麻烦。把中间的华通胶剥出来，剪碎，放在培养皿里面培养就好。它会从剪碎的组织块往四周爬出来的。等差不多张满了，消化一下，去掉组织块就好了。

作者: wuxiao101325 时间: 2010-11-16 11:40

本论坛有很多类似问题已经有解决方案，建议楼主多找找

作者: jhu132llh 时间: 2010-11-16 12:39

回复 3# 清影

( d( Q3 O! _- O/ H+ E
酶消化时间和筛子都差不多了，我们还用200目的那% {+ T+ K0 |. ?
我们实验室的经验在酶消化中间是要每隔20分钟要用枪吹打几次的，你可以参考一下；" Z2 E* V0 y2 G8 A; W1 y% ^9 E
过筛前腰充分的吹打稀释的，你可以适当的增加吹打次数和稀释倍数吧。- E% j( f& V9 w* z" P3 M
这是我们实验室的经验，希望对你有用。

作者: 雾里看花250 时间: 2010-11-27 11:00

我就是反复洗然后离心，多洗几遍，但有一个缺点就是会损失一些细胞。

作者: 清影 时间: 2010-11-29 09:37

,谢谢楼上的同胞们。1 o v) ?0 J# S/ c6 I
目前我们已经找到了一些解决途径，使用DAase,HAase,DTT等，效果还不错。单纯的增加稀释，对细胞损失确实很大。

作者: stylelife 时间: 2010-11-29 10:12

如果样品很少，撕下华通胶就更少了，我的方法是一起处理，先用胶原酶4度消化过夜，再用胰酶消化，这样过滤的时候就不怎么粘稠了哈！

作者: 静水流深 时间: 2010-11-29 17:18

胰酶消化时间要充足滤网需要用两个一大一小其实我们用原位组织块分离脐带多一点

作者: 清影VS猪猪 时间: 2010-12-6 15:02

请问“静水流深”，胰酶浓度多少？消化时间？我们经验，胶原酶消化后，若胰酶消化过度（>30min),细胞活力下降

作者: chuanbaozang 时间: 2010-12-7 09:14

我们的培养过程中试验了组织块贴壁和酶消化方法% K' u) q! ~+ Q4 o
组织块剪碎后，直接贴壁，2小时后补加培养基，迁出的细胞数量少，但后期活性比较好。& W2 c8 j4 h P; k* l- R
酶消化后很粘稠，没法过滤，所以我们经过洗涤后直接加培养基进行培养，虽然会有大量漂浮物，可3天左右会有很多贴壁细胞，经过换液后视野也会很澄明，可以试一下哦

作者: 清影 时间: 2010-12-9 17:01

请问楼上你们是离心洗涤么？转速多少？上清倒掉时会损失很多细胞

作者: zhenhuale 时间: 2010-12-9 17:02

同意楼上的，对于UC-MSC组织块贴壁法要比酶消化法更加经济也效果更好。

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