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标题: 请教：磁珠分选中的疑惑 [打印本页]

作者: mckf111 时间: 2010-11-5 12:11 标题: 请教：磁珠分选中的疑惑

目的：分人卵巢癌干细胞: P3 B. {* ^+ N. K c% v
方法：利用CD44+和CD117+双阳磁珠分选: b( r/ i: V. M' \0 \% X
奇怪的是利用CD44+初筛后被粘住的细胞有3% 在洗脱之后利用这3%做双阳性时却只剩下了万分之一照理说那些CD44+的细胞应该还是会全部被粘住啊应该还是3%左右才对咋的就只剩了万分之一呢4 u8 z" ~: D8 u1 L
不知谁能解我疑惑。。。

作者: leisong12 时间: 2010-11-5 12:46

1.磁珠分选初筛的纯度本身有无问题，上流式检验了没有？
2.既然CD44＋可以用磁珠分选，为什么不把两种抗体同时标上再用磁珠分选，这样保证CD44都能留下来，除非你的“应该还是3％左右才对”这句话本身立不住脚，也就是说双阳性细胞要比CD44＋细胞少的多，这样的化，万分之一的结果也是有可能的啊！

作者: mckf111 时间: 2010-11-5 13:09

回复 2# leisong12
1、流式检测出双阳是3%
2、您还没听懂我的问题就是如果我想分A+B+的细胞第一种方法我可以用双阳抗体一次分出来而第二种方法我也可以分两步去分出来先筛出A+细胞再把A+细胞过B+抗体分选两种方法得到的细胞数应该大体相当9 p/ S" e( V( m( N* k
而我这次是采用另一种方法就是先筛出A+细胞再把它们通过双阳抗体筛选照理说得到的应该和A+细胞数量相同才是因为A+B+中毕竟还是有A+抗体那么第一次的A+细胞还是照样被全部吸附住不会被洗脱下来管他B+有没有但是实验结果却是从3%降至万分之一我想不通啊

作者: amosummer 时间: 2011-8-22 08:53

是不是和分离的方法有关系，其实有时候我也担心同样的问题，到底分离下来的细胞是不是想要的细胞，还是只是细胞比较小，或是其他的原因恰巧被分离下来了，而不是因为表面抗体的原因，所以分离下来可以检测一下阳性细胞表面抗体表达的情况。

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