干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
碱性磷酸酶染色
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作者:
zhbshi998
时间:
2010-11-8 19:01
标题:
碱性磷酸酶染色
请问一下坛中做过碱性磷酸酶染色鉴定胚胎干细胞的大侠给一下操作步骤呢，染色前先要作何处理，希望不吝赐教，非常感谢！
作者:
ouyangjuan
时间:
2010-11-8 19:56
这个很容易的。
9 [1 g/ o& E3 p
收到细胞后，PBS洗两次，在4%多聚甲醛（避光）固定2分钟，TBST和PBS各洗一次，在加显色液反应（避光），小鼠为6-8分钟，人的为30分钟，再PBS洗就可以了。
作者:
carolshen
时间:
2010-11-9 10:35
顶顶顶
作者:
zhbshi998
时间:
2010-11-28 22:01
谢谢
作者:
zhbshi998
时间:
2010-11-28 22:01
非常感谢啦
作者:
是鸟就要去飞
时间:
2010-12-2 10:56
本帖最后由 是鸟就要去飞 于 2010-12-2 11:13 编辑
4 {0 ^2 X6 U$ m- Y/ Y9 F" b2 E! m
" x4 x, ~% {6 K5 [# N/ L
我只有这个，你看看
作者:
zhbshi998
时间:
2010-12-6 17:01
好漂亮的图，值得学习，谢谢
作者:
heather_lu
时间:
2010-12-6 20:18
不错的图，学习学习
作者:
zsc78
时间:
2010-12-11 00:42
本帖最后由 zsc78 于 2010-12-11 00:47 编辑
7 d+ x, ]2 I/ ]* h+ n- [ Q
9 r' T# F7 y6 d" w) \. p- q
不知道为什么在实验步骤中要“TBST和PBS各洗一次”，不用TBST对结果有影响吗？
* U5 ]1 ?* {- H
4 c- K% r( B3 ?/ x, T
请大家帮看一看我的ALP染色结果怎么样？
1 \2 z# \8 O; ?6 d0 |6 }0 j
[attach]18372[/attach]
2 s8 }- w6 R$ j- i& j1 d
* X2 S( A, G: w
作者:
vae有何不可
时间:
2010-12-11 12:34
[attach]18401[/attach]
作者:
vae有何不可
时间:
2010-12-11 12:35
这篇文献上的AP染色步骤较为详细，而且还附带了几张图。
作者:
yijuansss
时间:
2010-12-14 14:17
DINGDING
作者:
zhbshi998
时间:
2011-3-5 10:17
不错很感谢各位！
作者:
rubyrobin
时间:
2011-5-12 19:36
谢了，正 找着
作者:
czzhaozhu
时间:
2011-5-27 16:28
AKP染色具体步骤：
' p7 B7 u* O( q! _, `# R
(1). 配制AKP缓冲液（100 mmol/L Tris-HCl，PH 9.5，50 mmol/L MgCl2，0.1% Tween-20）。
9 F. D9 L+ O* _ @$ v$ \
(2). 从培养箱中取出生长5~6天的hESCs，弃去旧液，PBS洗两遍，加入含7.5%蔗糖的1%多聚甲醛室温下固定30 min。
! u* G7 J! ^( k& w
(3). AKP缓冲液洗涤3次×10 min。
0 o/ Y) z. X7 w7 w
(4). 配制新鲜的AKP染液：分别取45 μl NBT（nitroblue tetrazolium）染液和35 μl BICP（5-bromo-4-chloro-3-indolyphophate toluidinium）染液溶于10 mL AKP缓冲液中。
' H5 ~, p8 B. J: i1 ]5 {
(5). 加入染液，室温避光作用约20 min，自来水显色，显微镜下观察。
0 T. U7 [2 L5 k
作者:
lianmudichui
时间:
2011-8-16 10:01
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zsc78
的帖子
9 Z! J3 H X) |1 D% L4 X6 K
0 z0 ^1 i9 V. d" p" N
你是用的试剂盒还是别的什么做的，详细步骤能告诉一下吗？谢谢
作者:
gact
时间:
2011-8-17 13:39
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ouyangjuan
的帖子
J8 h3 d7 o# ?- s
, b T/ X- r4 v @4 A, C
显色液成分是什么？？？
( a" k9 o7 c, x! e6 A+ g
作者:
gact
时间:
2011-8-17 13:41
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是鸟就要去飞
的帖子
- b4 I3 H' @% \- T3 k1 O2 [
* c* x0 E# S9 Q! ]" ]" I1 G
收集细胞是指用爬片做，还是要胰酶消化离心收集？
作者:
zsc78
时间:
2011-8-17 23:13
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lianmudichui
的帖子
8 c& h; D% d1 \1 u9 Q3 u( _
0 W1 A* Z4 L" ^. [2 W3 R' }
Millipore的ALP试剂盒
作者:
dongxin
时间:
2011-9-6 15:58
1. 按Vector blue Alkalin Phosphatase Substrate Kit III 配置反应液；
3 t# U1 f$ q/ a& A
2. 用PBS洗细胞2-3次；
: y8 J+ K. `: J8 m8 C* h1 Z% F2 s
3. 将反应液加入培养皿中， 37°C 避光反应0.5-2h；
# F) }, E: Q5 k) w! {$ ?' O0 g, Q
4. 弃去反应液，用 100 mM Tris-HCl, pH 8.2 洗一次；
, _1 S5 ]1 M8 J V9 f( t
5. 加入PBS，在倒置显微镜下观察。
- S( a" A. t) `
供参考，祝好运！
0 ?0 ?' r9 Q* T( P5 U1 h7 c; X
作者:
准姿梅影
时间:
2011-11-21 22:41
学习了，非常感谢
作者:
majing217
时间:
2011-11-22 13:46
先拿PBS23次，然后4%多聚甲醛固定30秒，PBS再洗3遍，之后加入碱性磷酸酶染液，孵育30分钟，就可以看结果了。
作者:
郭小妹
时间:
2011-11-22 20:48
请问固定的时间对染色结果影响很大吗？
作者:
yuanyan2010
时间:
2011-12-12 20:04
我们实验室用的是BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒
0 v( ]' y2 T, Q" d3 {
染出来的是深蓝色的。拍照观察比较困难。我看有的文献染出来的是红色的，是怎么处理的？
作者:
yuanyan2010
时间:
2011-12-12 20:06
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是鸟就要去飞
的帖子
3 Z6 y O6 N7 m+ K+ @
- C1 D' g% v0 t1 |: o1 i& m' C
我们实验室用的是BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒
9 j6 O4 v# n) v
染出来的是深蓝色的。拍照观察比较困难。我看有的文献染出来的是红色的，是怎么处理的？
作者:
treestem
时间:
2012-1-4 19:23
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yuanyan2010
的帖子
4 z& t3 {% _5 h0 t
5 g0 S: ^8 I( {( o& `+ v. L* g+ v
我也有同感
作者:
treestem
时间:
2012-1-4 19:33
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ouyangjuan
的帖子
# K: X) o$ `6 h. [6 Z. u: W
; B; |# f6 Z+ g% b; w
为什么有的protocol上说要固定30min，有的说要固定30秒，有的是2min，固定的时间影响很大吗？你试过吗？
; v# g9 @1 I7 o
另外为什么染出来有的是红色的，有的是蓝色的呢？
: d5 Z* ?& v U4 m; R
PBS洗的时间有影响吗？
0 _) a* t9 U0 q$ V4 \! Y! [$ \* z
TBST的作用是什么？有的protocol中就没有TBST？
: P& o9 A" y; R3 d. P# ~
哪位能给个答案啊？
作者:
细胞海洋
时间:
2012-1-5 00:43
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treestem
的帖子
" a5 ?8 u# S, Y/ k0 q7 H
% J+ v! B6 ~) B: ]7 ]4 S* ?
建议重新发个贴子
作者:
2012712072
时间:
2014-12-15 15:38
请问，你们都用哪个公司的“碱性磷酸酶染液”，麻烦看见的大侠们帮忙回复一下，谢谢！
作者:
一席繁荒
时间:
2018-10-8 08:38
好图，好好学习一下
作者:
一席繁荒
时间:
2018-10-12 09:04
为啥我在《简明干细胞生物学》这本书上看到碱性磷酸酶染色的胚胎干细胞的颜色有的是深蓝紫色，有的是棕红色。求解答？
作者:
ghy529529
时间:
2019-8-20 15:21
顶 干细大家的分享
" Z: F$ u: e' I% j* f* r8 O5 }9 \3 k
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谢谢