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标题: 神经干细胞鉴定 [打印本页]

作者: 平平淡淡 时间: 2010-11-8 22:38 标题: 神经干细胞鉴定

我做细胞免疫荧光鉴定nestin，先用4%甲醛固定，再用0.2%tritonX-100透化5分钟，然后封闭孵一抗二抗，最后封片在荧光显微镜下看，为什么细胞碎片很多，基本上看不到完整细胞形态了，是不是透化过了头破坏细胞膜了？应该如何透化？？？

作者: dulaiyouyu 时间: 2010-11-10 20:50

固定和透化的浓度都没有问题的。会不会是漂洗的时候太不小心，细胞被冲掉了呢？只有一些碎片残留？

作者: beidouhan 时间: 2010-11-11 09:09

一抗有孵育4度过夜吗，做之前最好控制好细胞代数

作者: 痞子的烟头 时间: 2010-11-11 09:24

确保先前细胞状态不错，其它只要小心点就可以了，注意PBS洗的时候要轻点，

作者: jhu132llh 时间: 2010-11-11 10:29

是不是细胞爬片爬的不结实，然后再洗涤的过程就细胞被洗去了，就剩下细胞碎片了；
不过，应该细胞碎片也不会很多，
1.你的甲醛是用什么配的，PBS还是神马？注意从固定到染色一系列过程中所有溶液的渗透压了吗？# z6 T- ^+ X. r
2.0.2&的tritonX-100，5分钟对细胞也算不上什么大的伤害，我们也曾经做过，没问题的。考虑一下是不是洗的有点过了。

作者: 平平淡淡 时间: 2010-11-12 13:59

谢谢各位帮助。我的甲醛是用PBS配的，一抗也孵育过夜了。哪位能把您的具体步骤告诉我呢。

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